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不實情調查, 而且完成對哲學是科學的目標。~Martin H. Fischer
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Transfection 描述雜質的簡介入eukaryotic 電池使用病毒傳染媒介或調用其他方法。
術語transfection 為非病毒方法是經常被使用的關於哺乳細胞, 當術語轉換更喜歡描述非病毒DNA 調用在細菌和非動物eukaryotic 電池裡譬如真菌、海藻和工廠。
動物電池的Transfection 典型地介入打開臨時毛孔或' �&洞的在電池血漿膜, 允許物料�&起。基因(譬如supercoiled 質粒DNA 或siRNA 構建), 甚至蛋白質譬如抗體, 也許是transfected 。除electroporation 之外, transfection 可能由混合執行負離子油脂以物料生產liposomes, 熔化與電池血漿膜和放置他們的貨物裡面。
transfection 的原義是' 傳染由轉換', 即DNA (或核糖核酸) 從真核病毒或噬菌體的簡介入電池, 造成傳染。由於術語轉換有其它感覺在動物細胞生物學(一個基因變化允許長期傳播在文化上, 或獲得財產中特點癌細胞), 術語transfection 獲取了, 為動物電池, 其一個變化的當前含義在電池屬性上導致通過DNA 介紹。
Transfection 是實驗DNA 也許被投入入一個被開化的哺乳細胞的方法。這樣實驗通常執行使用被克隆的DNA 包含編碼序列和控制區域(促進者, 等) 為了測試是否DNA 將被表達。因為被克隆的DNA 也許廣泛地被修改了(例如, 蛋白質束縛位置在促進者也許被修改了或被去除了), transfection 經常使用測試是否特殊修改影響基因的功能。
Transfection 繪製:
能力綜合核糖核酸在實驗室裡對許多技術至關重要。Radiolabeled 和非radiolabeled 核糖核酸探針必需為許多協議, 並且他們可能容易地被綜合在小規模體外副本回應允許他們的用途在汙點雜交和nuclease 保護檢驗。
體外副本要求一塊被淨化的線性DNA 模板包含促進者, ribonucleotide triphosphates, 包括DTT 和鎂的緩衝系統
體外副本要求一塊被淨化的線性DNA 模板包含促進者, ribonucleotide triphosphates, 包括DTT 和鎂的緩衝系統
有介紹外部DNA 各種各樣的方法入一個eukaryotic 電池。許多材料被使用了作為承運人為transfection, 可能被劃分成三種類: (負離子) 聚合物、liposomes 和nanoparticles 。
最便宜的(和最少可靠) 方法的當中一個是transfection 由鈣磷酸鹽, 由F. L. Graham 和A. J. van der Eb 原始發現在1973[citation 需要] (參見也[ 1 ]) 。HEPES 緩衝的鹽解決方法(HeBS) 包含磷酸鹽離子與氯化鈣解決方法被結合包含DNA 是transfected 。當二被結合, positively-charged 鈣和negatively-charged 磷酸鹽的美好的沉澱物將形成, 束縛DNA 是transfected 在其表面。沉澱物的暫掛然後被添加來電池是transfected (通常細胞培養增長在單層) 。由進程不整個地被瞭解, 電池佔去一些沉澱物, 和與它, DNA 。
其它方法使用高度分支的有機化合物, 所謂的dendrimers, 束縛DNA 和讓它進入電池。一個非常高效率的方法是DNA 的包括是transfected 在liposomes, 即與電池結構是在一些方面相似, 可能實際上熔化與細胞膜的小, 膜跳起的機體裡, 釋放DNA 入電池。為eukaryotic 電池, 油脂正離子根據transfection 更加典型被使用, 因為電池是更加敏感的。
其它方法是對負離子聚合物的用途譬如DEAE 葡聚糖或polyethylenimine 。negatively-charged DNA 束縛對polycation 並且複雜由電池佔去了通過endocytosis 。
對transfection 的一個直接途�&是基因槍, DNA 被耦合對"然後被射擊" 直接地入目標電池的中堅力量。一種惰性固體(公用金子的) 的nanoparticle DNA 可能並且被介紹入電池使用病毒作為承運人。在這些情況下, 技術叫做病毒轉導, 並且, 電池被認為transduced 。
transfection 其它方法包括nucleofection 、electroporation 、熱震動、magnetofection 和私有的transfection 試劑譬如Lipofectamine, Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene 或DreamFect 。
為transfection 的多數申請, 它是充足的如果transfected 基因臨時只被表達。因為DNA 被介紹在transfection 進程中通常不被插入入核染色體, 外部DNA 丟失在最新階段當電池接受有絲分裂。如果這是渴望的transfected 基因實際上保留在電池的染色體並且其女兒電池, 一穩定transfection 必須發生。
完成這, 其它基因是co transfected, 給電池一些選擇好處, 譬如抵抗往某一毒素。一些(非常少數) transfected 電池, 偶然, 插入了外部基因入他們的染色體。如果毒素, co transfected 基因提供抵抗, 然後被添加來細胞培養, 只有那些少量電池與外部基因被插入入他們的染色體能激增, 當其它電池將死。在施加有一段時間了這選擇壓力以後, 唯一電池與一穩定transfection 依然是和可能進一步培養。
公用座席為穩定transfection 是Geneticin, 亦稱G418, 是毒素可能由新黴素抗性基因的產品中立化。
體外副本要求一塊被淨化的線性DNA 模板包含促進者, ribonucleotide triphosphates, 包括DTT 和鎂的緩衝系統
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