電池轉染

轉染描述雜質的簡介到真核狀態的電池使用病毒向量或調用其它方法。

而術語轉換在細菌和非動物的真核狀態的電池更喜歡描述非病毒脫氧核糖核酸調用例如真菌、海藻和工廠，非病毒方法的術語轉染是最常用的關於哺乳細胞。

動物電池的轉染典型地介入打開臨時毛孔或『漏洞』在電池質膜，允許材料增加。 基因(例如supercoiled質粒脫氧核糖核酸或siRNA構建)，甚至蛋白質例如抗體，可能transfected。 除電穿孔之外，轉染可以通過混合負離子油脂執行以材料生產脂質體，熔化與電池質膜并且放置他們的貨物裡面。

轉染的即原義是『由轉換的傳染』，脫氧核糖核酸(或核糖核酸的)簡介從真核病毒或噬菌體到電池，造成傳染。 由於術語轉換有另一個意義在動物細胞生物學(一個基因變化允許長期傳送在文化上或者獲得財產中特點癌細胞)，術語轉染為動物電池獲取了，其一個變化的當前含義在通過脫氧核糖核酸介紹導致的電池屬性上的。

轉染是實驗脫氧核糖核酸可能被放到一個被開化的哺乳細胞的方法。 這樣實驗通常執行使用包含編碼序列和控制區域(促進者等等)的被克隆的脫氧核糖核酸為了測試脫氧核糖核酸是否將表示。 因為可能廣泛地修改了被克隆的脫氧核糖核酸(例如，可能被修改了或去除了促進者的蛋白質束縛位置)，轉染是常用的測試特殊修改是否影響基因的功能。

轉染繪製：

轉染應用

能力綜合核糖核酸在實驗室裡對許多技術至關重要。 放射形同位素示蹤和非放射形同位素示蹤的核糖核酸探測對於許多協議是必需的，并且他們在小規模體外副本回應可以容易地被綜合允許他們的在汙點雜交和核酸酶保護檢驗的使用。

• 向量或脫氧核糖核酸
• 電池
• 轉染試劑

體外副本要求包含促進者，核苷酸triphosphates，包括DTT和鎂的緩衝系統的一塊被淨化的線性脫氧核糖核酸模板

體外副本要求包含促進者，核苷酸triphosphates，包括DTT和鎂的緩衝系統的一塊被淨化的線性脫氧核糖核酸模板

轉染方法

有介紹外部脫氧核糖核酸多種方法到一個真核狀態的電池。 許多材料使用了作為承運人為轉染，可以分開成三種類： (負離子)聚合物、脂質體和nanoparticles。

最便宜的(和最少可靠)方法之一是轉染由磷酸鈣，在1973年原來地發現由F.L.格雷姆和A.J. van der Eb [需要的引證] (也參見[1])。 包含磷酸鹽離子的HEPES緩衝的食鹽水(HeBS)與包含脫氧核糖核酸的氯化鈣解決方法結合transfected。 當二被結合，帶陽電荷的鈣和帶負電荷的磷酸鹽的細致的沉澱物將形成，束縛在其表面transfected的脫氧核糖核酸。 沉澱物的暫掛然後被添加到transfected的電池(通常在單層增長的細胞培養)。 由不完全地瞭解的進程，電池佔去一些沉澱物和與它，脫氧核糖核酸。

其他方法使用高度分支的有機化合物，所謂的dendrimers，束縛脫氧核糖核酸和讓它進入電池。 一個非常高效率的方法是在脂質體transfected的脫氧核糖核酸的包括，即在一些方面類似電池結構，并且可能實際上熔化與細胞膜的小，膜限制的機體，釋放脫氧核糖核酸到電池。 對於真核狀態的電池，因為電池是更加敏感的，轉染更加典型使用根據的油脂正離子。

另一個方法是使用負離子聚合物例如DEAE葡聚糖或polyethylenimine。 帶負電荷的脫氧核糖核酸束縛對polycation，并且複雜由電池佔去通過endocytosis。

對轉染的直接方案是基因槍，脫氧核糖核酸被耦合對「然後被射擊」直接地到靶細胞的中堅力量。一種惰性固體(通常金子)的nanoparticle 脫氧核糖核酸可能也介紹到電池使用病毒作為承運人。 在這類情況下，技術稱病毒轉導，并且，電池被認為轉換。

轉染其他方法包括nucleofection、電穿孔、熱震動、magnetofection和所有權轉染試劑例如Lipofectamine， Dojindo Hilymax， Fugene， jetPEI， Effectene或者DreamFect。

穩定與臨時轉染方法

對於轉染的多數應用，如果transfected基因臨時只表示，是滿足的。 因為在轉染進程中介紹的脫氧核糖核酸通常沒有被插入到核染色體，外部脫氧核糖核酸丟失在後期階段，當電池經過有絲分裂時。 如果希望transfected基因在電池和其子細胞的染色體實際上保持，一穩定的轉染必須發生。

要完成此，另一個基因是cotransfected，產生電池若乾選擇好處，例如往某一毒素的抵抗。 某些(非常少數) transfected電池，偶然，插入了外部基因到他們的染色體。 如果毒素， cotransfected基因提供抵抗，然後被添加到細胞培養，只有與外部基因的那些少量電池被插入到他們的染色體能激增，而其他電池將中斷。 在有一段時間了施加此選擇壓以後，與一穩定的轉染的仅電池依然是并且可以進一步培養。

穩定的轉染的公用座席是Geneticin，亦稱G418，是毒素可以由新黴素抗性基因的產品中立化。

體外副本要求包含促進者，核苷酸triphosphates，包括DTT和鎂的緩衝系統的一塊被淨化的線性脫氧核糖核酸模板

轉染的技巧

• 總是使用核糖核酸酶抗化劑!
• 與T7核糖核酸噬菌的聚合酶的節省額貨幣： 與N終端的克隆他的6標籤是可用的。 如果您得到此克隆，您能淨化與高活性的很多T7聚合酶(ref ： 他B， Rong M， Lyakhov D， Gartenstein H，戴茲G， Castagna R， McAllister重量， Durbin RK。 蛋白質Expr Purif。 1997年， 9， 142-151)。
• 要去除脫氧核糖核酸模板，使用無核糖核酸酶脫氧核糖核酸酶。 我們使用了RQ1 (Promega)被添加的脫氧核糖核酸酶15分鐘，并且它很好運作。 

存儲Trasfection試劑

• 核糖核酸最好存儲在與乙二胺四乙酸的中立酸碱度。
• 建議使用TE緩衝(10 mM TrisHCl、酸碱度7.5， 1 mM乙二胺四乙酸)，然而應該準備這與任意被淨化的核糖核酸酶(preferablly微孔水)。

排錯轉染問題

不合格的轉染

• 老轉染試劑
• 不正確地存儲的轉染座席
• 質量差脫氧核糖核酸或向量
• 不足的脫氧核糖核酸金額
• 不足的轉染試劑
• 許多個脫氧核糖核酸
• 許多種轉染試劑

在轉染的參考

在轉染的參考

1. Bacchetti S，格雷姆・ F (1977)。 「基因的調用胸腺嘧啶脫氧核苷激酶的到由被淨化的單純疱疹病毒脫氧核糖核酸的胸腺嘧啶脫氧核苷激酶短少人類細胞」。 Proc國家Acad Sci美國74 (4) ： 1590-4. PMID 193108。