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Sirna Transfection 協議

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siRNA transfection 協議: Transfect 6 塊好的板材

申請第一張siRNA 處理當電池是60% 匯合(評定confluency 與電壓表); 在星期五在星期三鍍1.5x10^6 電池, transfect 。為每個井:

稀釋2.5 ug siRNA (20uM 是近似地0.26ug/ul 。9.62 ul 每很好一塊6-well 板材) 以培養基對100 ul 的一個最終數量。 Use 障礙吸移管要訣。您能做主要混合如果所有井將是transfected 與同樣siRNA 。做這在一支不�&的被真空加熱的塑料管。
添加12 ul RNAiFect (Qiagen - 或其他核糖核酸transfection 試劑, 看製造商的協議) 每siRNA mastermix 管和柔和地混合。
孵化15 分鐘在室溫允許複雜形成在siRNA 和油脂之間。
吐氣媒體從電池和添加900ul 新媒體來每個很好。
添加siRNA 混合物(112 ul 每井) drop-wise 當柔和地打旋的板材。

以後申請第二張siRNA 處理2 個日, 從事步驟被概述以上。第二transfection 將添加來基因的減少表達式利益。

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