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由Moleculardude 寫和更新2008 年3月。版權2007/2008 。
定義: SDS-PAGE 是對鈉dodecyl sulfate (SDS)polyacrylamide膠凝體電泳法的 縮寫。
SDS-PAGE 是一個分子生物學技術由範圍使用相應地分離蛋白質。SDS-PAGE 可能還分離DNA 和核糖核酸分子。
在什麼大概是解決蛋白質混合物的最強有力的技術, 蛋白質暴露於離子洗滌劑SDS (鈉dodecylsulfate) 在和在膠凝體電泳法期間之前。 SDS 弈質蛋白質, 導致multimric 蛋白質離解入他們的亞單位, 並且所有多縮氨基酸鏈子是牽強的入延長的相應一致以相似的charge:mass 比率。 SDS 處理消滅因此差額的作用在形狀上的以便鏈長, 反射質量, 是蛋白質的遷移率的單一定列式在SDS- polyacrylamide 電泳法。
不同在分子量由少於的鏈子百分之10 可能由這個技術分離。 而且, 蛋白質的分子量可能由與運行在同樣膠凝體的蛋白質梯子或分子量梯子的比較確定。
(參見圖1)
圖1 。這個acrylamide 膠凝體被使用分離蛋白質。色的地點是標準範圍標記, 是prestained 。這通常使用做西部汙點。蛋白質調用到膜和然後被檢測與抗體對特定蛋白質。
SDS-PAGE, 鈉dodecyl sulfate polyacrylamide 膠凝體電泳法, 是技術使用在生化、遺傳學和分子生物學分離蛋白質根據他們的電泳流動性(多縮氨基酸鏈子或分子量的長度的功能並且高階蛋白質可摺�&、posttranslational 修改和其它系數) 。
蛋白質的解決方法被分析與SDS, 弈質附屬和非二硫化物被鏈接的三重結構的一種–負離子–洗滌劑首先被混合, 並且嚮各蛋白質應用一個負電荷以其質量的比例。沒有SDS, 不同的蛋白質以相似的分子量�&移居另外由於在質量充電比率上的差額, 因為各蛋白質有一種等電位點和分子量特殊性對其主要結構。這為人所知作為當地頁。添加SDS 解決這個問題, 因為它束縛對和展開蛋白質, 給一個近的統一負電荷沿多縮氨基酸的長度。
SDS 困境以大約1.4 g 的比例SDS 每1.0 g 蛋白質(雖然約束比率可能變化從1.1-2.2 g SDS/g 蛋白質), 給一個近似地統一mass:charge 比率為多數蛋白質, 以便距離遷移通過膠凝體能被預測直接地與唯一蛋白質有關的範圍。一種跟蹤的染料也許被添加來蛋白質解決方法允許實驗者跟蹤蛋白質解決方法的進展通過膠凝體在電泳運行期間。
電泳法是分離的一個技術, 或解決的分子在混合物在一個應用的電場的影響之下, 並且叫做 電泳流動性。 被溶化的分子在一個電場移動, 或移居以速度由他們的charge:mass 比率確定。 例如如果二有同樣質量和塑造, 那個以更加巨大的淨充電快速地將行動朝電極。 小分子的分離, 譬如氨基酸和nucleotides, 是對電泳法的許多用途的當中一個。 在這種情況下, 範例小下落被放置在濾紙或其它多孔基體小條, 由一個�&辦的解決方法被浸泡。 當一個電場被應用作為小條的末端, 小分子溶化了在�&辦的解決方法移動沿小條以費率對應於他們的巨大他們的充電。
由於不同在範圍和形狀的許多蛋白質或核酸有幾乎相同charge:mass 比率, 這些大分子電泳法在解決方法導致不同的長度分子的一點點或沒有分離。 但是, 蛋白質和核酸的成功分離可能由電泳法完成以各種各樣的膠凝體(半固體暫掛在水中) 而不是在一個液體解決方法。 蛋白質的電泳分離最公用進行在polyacrylamide 膠凝體。 這些膠凝體被轉換在一副眼鏡板材之間由聚合acrylamide 單體的解決方法入polyacrylamidechains 和同時cross-linking 鏈子入一個半固體矩陣。 膠凝體的毛孔範圍可能被調整變化polyacrylamide 和交互相聯的試劑的濃度。
當蛋白質混合物嚮膠凝體和電流被應用被應用, 更小的蛋白質快速地移居比更大的蛋白質通過膠凝體。 移動速度被膠凝體s’毛孔範圍和電場的純度影響。 毛孔在一個高度被交互相聯的polyacrylamide 膠凝體相當小。 這樣膠凝體能解決小蛋白質和peptides, 但大蛋白質不能行動通過它。
依照被提及, 蛋白質與SDS 被混合困境對蛋白質和弈質他們的附屬和非二硫化物被鏈接的三重結構增加熱的一種負離子洗滌劑。SDS 嚮各蛋白質並且應用統一負電荷以其質量的比例。
如果SDS 未被使用在分離, 蛋白質以相似的分子量不同地�&移居在膠凝體由於在他們的質量上的差額對充電比率。因為蛋白質被分離使用電流和pore 膠凝體矩陣的範圍, 在充電上的差額(除質量之外) �&充當在分離的一個角色。
一種跟蹤的染料也許被添加來蛋白質解決方法允許實驗者跟蹤蛋白質解決方法的進展通過膠凝體在電泳運行期間。
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