穩定Transfection 協議

AfCS 運用antisense 技術操作信號蛋白質表達式在未加工264.7 巨噬細胞像電池線路。這可能由基因特定antisense oligonucleotides 達到(ASOs 的) transfection 。以下程式介入ASOs 的transfection 入未加工的264.7 電池使用FuGENE 6 transfection 試劑。隨後, 被隔絕的總核糖核酸或蛋白質從這些transfected 電池可能被使用估計mRNA 或蛋白質擊倒的級別, 各自地。- [讀的 Antisense Oligonucleotide Transfection 未加工的264.7 電池與FuGENE 6 在24-Well 盤]

搏動的電場可能被使用介紹DNA 入各種各樣的動物電池。Electroporation 運作很好以是折射的對其它技術的電池線路, 譬如鈣磷酸鹽Dna coprecipitation 。但, 和以其它transfection 方法, 優選的條件為electroporating 的DNA 入未經考驗的電池線路必須實驗被確定。- [讀的 DNA Transfection 由Electroporation]

CHO Lec3.2.8.1 電池有4 個獨立變化在N 和O glycosylation 路。當開化與阿爾法glucosidase I 抗化劑N 丁基deoxynojirimycin, 糖蛋白生產了在CHO Lec3.2.8.1 電池裡是完全地易受Endo H 消化。Endo H 劈開chitobiose, 留下唯一N 被鏈接的N-acetylglucosamine 每是理想的為蛋白質溶解度和特殊carb 蛋白質交往維護, 譬如在第一N acetyl 氨基葡萄糖殘滓之間和tryp 的站點。- [CHO Lec 電池協議穩定Transfectant 的讀的設置]

穩定transfected 電池, 被生成在程式的第一二個階段, 導致為目標基因的表達式。在收穫和病勢漸退以後, lysates 被SDS-PAGE 和immunoblotting 分析。- [讀的 四圜素作為管理者可誘導基因表達III]

協議使用transcriptional trans 活化計tTA 驅動其自己的表達式和那目標基因的一個autoregulatory 系統。程式的第一階段描述怎麼生成表達或tTA 單獨或tTA 和四圜素被調控的目標基因NIH-3T3 電池的穩定線路。- [讀的 四圜素作為可誘導基因表達協議管理者]

程式的這個階段描述transfection 與電池線路目標基因已經表達可誘導tTA 。在這實例, 目標基因是transfected 在運載puromycin 抵抗作為一個可選擇的標記的質粒。- [讀的 四圜素作為管理者可誘導基因表達協議II]