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科學自殺當它採取一個信條。~Thomas 亨利·Huxley
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電池的蛋白質含量估計包括千位不同的類型蛋白質
以表達式的一個力學範圍。當前被使用的技術介入蛋白質成分的檢索, 這個非常複雜混合物的分餾,
各被分離的和被隔絕的種類, 廣泛的質量光計測定的分析和最終符合結構資料enzymatic 解朊作用被生成反對知道的蛋白質或被期望的染色體表達式產品資料庫。
這個程式介入初期使用1 或2-dimensional 電泳法(DE) 。使用1-DE, 蛋白質被分離根據分子質量; 技術是可再生的, 可能被使用為蛋白質在10 300 的質量範圍–kDa, 但限制了解決方法。
為更加複雜的蛋白質混合物的分離, 2-DE 是更喜歡的方法。這介入分離蛋白質first
根據他們的淨充電由一個等電位聚焦步驟和然後, 在第二維數, 根據他們的分子質量使用給高分離efficiency 的鈉dodecyl sulfate polyacrylamide 膠凝體電泳法(SDS-PAGE) 。
質量光譜(女士) 是選擇方法為identification
被分離的蛋白質, 和2-DE 和質量光譜
現在代表幾一千蛋白質可能分離, 檢測和identified 自動化的時�&的技術。
Proteomics 方法學由蛋白質分離和地點首字母完成由2-DE 被然後進行蛋白水解的消化產生peptide 片段混合物蛋白質的切除跟隨利益。peptides 被質量光譜分析, 首字母使用MALDI-MS 為分子質量peptide 質量的確定和生成fingerprint 。如果資料庫在這個狀況下搜索產生模棱兩可的結果, 第二個質量光計測定的分析, ESI-MS/MS, 使用生成被使用為更加嚴密資料庫搜索的順序資訊。
從質量光譜被獲得在對蛋白質文摘混合物的分析, peptide 質量映射或peptide 質量fingerprint
即peptide 片段的分子質量, 可能被查明。經常, 如果氨基酸順序是sufficiently 唯一和質量
準確性sufficiently 高, 質量映射可能使用搜索資料庫12–15 成功辨認蛋白質沒有對進一步分析的需要。如果, 然而, 資料庫搜索導致模棱兩可的結果, 那麼更加進一步的女士分析, 介入對縱排質量光譜的用途(MS/MS), 連續被承擔在各peptide 在混合物生成順序, 或部分順序, 以順序貨簽著名, 為這些peptides 。這由對ESI-MS/MS19 的用途頻繁地達到並且一個額外purification 步驟必須通常執行分離peptides 從也許是存在導致peptide 信號的稀釋的鹽和洗滌劑。
進一步資料庫搜索與兩個peptide 的分子質量
並且順序貨簽資訊應該導致毫不含糊的蛋白質identification 。
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