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科學是情況; 正房子由石頭做成, 如此是科學由情況做成; 但堆石頭不是房子並且情況的一件收藏品不一定是科學。~Henri Poincar3e
二維膠凝體電泳法(並且稱被省略作為第2 電泳法或2-DE) 立即是的膠凝體電泳法方法是常用分離或分析非常相似在範圍, 和並且許多蛋白質譬如完全套蛋白質當前在一指定的電池時光, proteome 。
第2 膠凝體電泳法分離蛋白質在二維數、等電位點和質量。這允許不能被分離或否則被區別在1-D 膠凝體, 包括相似地大小的蛋白質和許多蛋白質蛋白質的分離(譬如proteome) 。
所有蜂窩電話蛋白質電泳法通過SDS 膠凝體可能分離蛋白質有相對地大差額在分子量然而, 它無法欣然解決蛋白質有相似的重量(即53-kDA 蛋白質從52-kDA 蛋白質) 。
在1D 膠凝體電泳法方法, 蛋白質被分離在是他們由質量分離唯一) 的一維數(。
在第2 電泳法, 分離從1-D 電泳法開始然而那裡是發生的第二分離, 分離蛋白質由充電在方向90 度從開始。
結果是, analytes 被塗橫跨二維表面而不是沿著線路。因而, 由於這樣的事實蛋白質由充電分離由不僅質量而且, 它是不太可能的, 有將是超過一蛋白質一致被給地點在第2 個膠凝體。這是因為它是不太可能的二蛋白質�&共享不僅同樣確切的質量而且同樣充電。
所以, 在第2 個膠凝體, analytes 更加有效被分離在第2 電泳法比在1-D 電泳法由於第二個分離步驟由充電。
為了分離一個相似的質量的蛋白質, 其它蛋白質的物理特性必須使用。也許被使用在分離的其它重要實際蛋白質屬性是電荷, 由酸性和基本的殘滓的數量確定在蛋白質和他們的組充電。
二無關的蛋白質有相似的質量不太可能有相同淨充電因為他們的氨基酸順序�&是不同的, 並且因而酸性和基本的殘滓的充電和數量�&給另外淨充電。這�&允許這些蛋白質不是由1-D 膠凝體電泳法分離由第2, 但。
在第2 個膠凝體分離方法, 蛋白質由等電位點實際上分離(等電位點(pI) 是特殊分子或表面不運載淨電荷) 的酸鹼度。
酸鹼度梯度嚮膠凝體被申請並且電潛在是應用的橫跨膠凝體, 使一個末端正比其他。在所有pHs aother 比他們的等電位點, 蛋白質將被充電。如果他們positively-charged, 他們將被拉扯往膠凝體的更負的末端並且如果他們negatively-charged 他們將被拉扯對膠凝體的更正的末端。一旦他們到達膠凝體的區域以酸鹼度對應於他們的等電位點, 然而, 他們將變neutraly 充電和將保留在那個地點。
在分離以後, 蛋白質被分離在第2 個膠凝體, 是無形的對肉眼。形象化蛋白質在膠凝體, 非常蛋白質的敏感弄髒和探知方法必須被執行。
這歸結於幾個情況:
在第2 電泳法, 非常敏感汙點必需因此。這些蛋白質可能通過各種各樣的平均值然後檢測, 但最公用是銀弄髒和coomasie 汙點。
在第2 個膠凝體銀色弄髒, 銀色膠體嚮膠凝體被應用。銀與半胱氨酸組結合在蛋白質之內。銀由對紫外光的暴露然後變暗。銀的黑暗在地點, 可能與相當數量銀和因此相當數量蛋白質有關在一個指定的地點在膠凝體。這個評定罐頭只給近似金額, 但是充分的為多數目的。
Coomassie 染料束縛對蛋白質通過physisorption 對氨基酸譬如芳香氨基酸、氨基胍基戊酸, 和組氨酸。Coomasie 並且被使用在布雷得佛方法。允許地點形象化包含少於1 ng 蛋白質的敏感無毒coomasie 汙點被生成了。
SYPRO 紅寶石是一個非常敏感第2 個蛋白質探知方法汙點, 允許形象化大約1/2 每ng 蛋白質在一個指定的地點。不利是方法要求紫外光形象化汙點, 如此要求紫外光的用量。這使剪切地點困難和潛在危害由於可能的紫外風險。
一個二維膠凝體電泳法協議為7 cm IPG 剝離Amersham GE 感覺。
步驟1 。IPG 小條的再水化
| 線程數 | |||
| 線程數稱謂/海報 | 前筆過帳 | 回復 | 視圖 |
| 07-17-2007 下午07:51 | 1 | 565 | |
| 08-27-2007 下午12:14 | 1 | 367 | |
| 08-27-2007 上午11:10 | 0 | 348 | |
| 06-04-2007 上午12:01 | 5 | 693 | |
| 07-17-2007 下午08:02 | 4 | 1027 年 | |
| 01-24-2008 下午07:17 | 3 | 233 | |
| 02-12-2007 上午08:08 | 3 | 646 | |
| 12-07-2006 上午08:13 | 4 | 710 | |
解決困難的斑紋第2 形成膠凍
喂所有, 我有困難與第2 個膠凝體延遲。我的膠凝體繼續垂直斑紋。有任何人延遲有這個問題和有任何...
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