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有實際上二個事、科學和觀點; 前產生知識, 後者無知。~Hippocrates (c460-c.377 BCE) 希臘醫師。
在紫外Absorbance 附近是紫外Absorbance 在280 毫微米: 一臺簡單分光儀可能定量相當數量蛋白質在解決方法。 輻射吸收由蛋白質在近紫外取決於Tyr 和Tr 目錄(和在程度上在相當數量Phe 和二硫化物債券) 。因而A280 很大地變化在不同的蛋白質之間(為一個1 個mg/mL 解決方法, 從0 4 [ 為一些富有酚基乙氨酸的羊毛蛋白質], 雖然多數值是在範圍0.5–1.5) 。這個方法有其好處; 它簡單, 並且範例可退回。是那如同它可以它並且有包括的不利, 干涉從其它髮色團, 並且特定吸收值為被測量的蛋白質必須是堅定的。核酸的絕種在280 nm 區域也許是儘量蛋白質在他們的同樣波長, 和因此, 核酸幾百分比可能很大地影響吸收的10 次。
peptide 債券的吸收強烈是在紫外以最大數量在大約190 蛋白質 強的吸收在這些波長被使用了在蛋白質確定的毫微米。由於困難由吸收由氧氣和常規分光光度表低輸出造成在這個波長, 評定更加方便地被做在205 毫微米, absorbance 是大約半那在190 毫微米。多數蛋白質有絕種系數在205 毫微米為一個1 個mg/mL 解決方法30–35 和在20 和24 之間在210 毫微米。 各種各樣的旁邊鏈子, 包括那些Trp, Phe, Tyr, 他的, Cys, 見面了, 並且Arg (遞減次序), 做對A205 的攤繳。這個方法好處包括簡單和敏感性。範例可退回並且另外有在回應上一點變化在不同的蛋白質之間, 如此允許蛋白質的近absolute 確定。這個方法不利包括必要為分光光度表的準確定標在紫外。許多緩衝和其它要素, 譬如heme 或pyridoxal 組, 強烈吸收在這個區域。
參見我們的 蛋白質含量協議 和 蛋白質含量協議從其它實驗室。
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