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推遲您的想像力, 當您推遲您的大衣, 當您進入實驗室。但再投入它, 當您穿上您的大衣, 當您離開。~Attributed 對克勞德·Bernard (法國生理學者1813-1878)
蛋白質確定由UV 吸收協議, (被修改從協議被Alastair Aitken 和Mich2ele P. Learmonth)
1 。0.1 M K2SO4 (酸鹼度7.0) 。
2. 5 毫米鉀磷酸鹽緩衝, 酸鹼度7.0 。
3. 非離子洗滌劑(0.01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl 。
5. 0.2-.m Millipore (Watford, 英國) 補白。
6. 紫外可視分光儀: 氫閃亮指示應該被選擇為最大 強度
在特殊波長。
7. Cuvets, 石英, 為< 215 毫微米。
1 。一個可靠的分光光度表是必要的。蛋白質解決方法必須被稀釋在
緩衝對是在票據之內的準確範圍(的濃度參見附註1 和2) 。
2 。蛋白質解決方法被評定可能是在大範圍緩衝, 因此這通常是沒有問題查找一是適當的為蛋白質也許已經是在特殊緩衝必需為洗淨步驟或檢驗為□活性, 例如(參見附註3 和4) 。
3 。評定蛋白質解決方法的absorbance 在280 毫微米, 使用知道是透明對這個波長的石英cuvets 或cuvets, 用解決方法的數量被裝載充足蓋光束通過的開口。
4 。值被獲得將取決於cuvet 的路�&長度。如果沒有1 cm, 它必須是
由適當的系數調整。啤酒Lambert 法律聲明那: A (absorbance) = ε = 絕種 ε 系數、c = 濃度在mol/L 和l = 光學路�&長度在cm. 所以的c l, 如果 ε 為人所知, A 評定直接地給濃度, ε 是
正常引述為1 cm 路�&長度。
5 。紫外absorbance 的實際值為被測量的蛋白質必須由某一absolute 方法確定, 即, 被計算從氨基酸構成, 可能由氨基酸分析確定。紫外absorbance 為蛋白質然後被計算根據以下配方: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M
那裡nw, ny, 和北卡羅來納是Trp 、Tyr, 和Cys 殘滓的數量在多縮氨基酸
質量M 和5690, 1280 年和120 是各自絕種系數為這些殘滓(參見附註5) 。
參見 蛋白質含量協議從其它實驗室。
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