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科學自殺當它採取一個信條。~Thomas 亨利·Huxley
Immunoprecipitation 是使用抗體特定對蛋白質從解決方法取消那些蛋白質的技術。抗體蛋白質複雜被沉澱在解決方法外面增加抗體約束蛋白質的一份不能溶解的表單。實例包括蛋白質A, 蛋白質G, Zysorbin 、Immunoprecipitin, 或第二抗體的添加對解決方法(參見繪製1 下面) 。
範例可能然後被洗滌在降雨雪和離心法以後。沉澱物可能然後運行在SDS-PAGE 膠凝體以蛋白質範例緩衝。通常蛋白質範例是radiolabeled 在電池病勢漸退之前。這由通常添加做radiolabeled 氨基酸來電池。這使事簡單當蛋白質容易地然後被檢測在影片當運行在膠凝體作為地點將散發放射線和將暴露影片。您能然後估計為蛋白質的範圍(在分子量以比較估量標準), 和數量(由比較被對待的範例或與數量標準) 。
而且, immunoprecipitation 程式並且允許不非常豐富或難檢測使用西部汙點蛋白質的濃度。IP 可能集中蛋白質由決定10,000 摺�&當它可能採取電池lysates 的大數量和集中您的蛋白質利益入可能然後被使用為西部汙點分析或其它方法的小沉澱物。
1) 分子量和數量的確定immunoprecipitated 蛋白質由SDS-PAGE 。
2) Immunoprecipitation 使用估計為蛋白質蛋白質交往。這由immunoprecipitation 為一蛋白質, 和然後弄髒做為其它蛋白質。
3) 蛋白質的綜合的費率的量化在電池裡由確定數量radiolabeled 蛋白質被做在特定時間期間。
4) Immunoprecipitation 啟用對否則難檢測蛋白質的濃度。
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Immunoprecipitation 協議
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Immunoprecipitation 協議目錄(外部連結)
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解決困難Immunoprecipitation |
得知Immunoprecipitation |
根據immunoprecipitation 或IP 的申請, 您將想要使用不同的病勢漸退緩衝。 病勢漸退緩衝選擇重要和依靠蛋白質的特性利益。
如果想要學習蛋白質或蛋白質蛋白質交往的phosphorylation, 您應該嘗試Np-40 。
如果您學習蛋白質的總蛋白含量級別, 您應該嘗試RIPA 。
RIPA 緩衝 給更低的背景在immunoprecipitation 。但是, RIPA 可能弈質一些蛋白質。如果您�&辦immunoprecipitation 試驗學習蛋白質蛋白質交往, RIPA 不應該被使用當它可能打亂protein:protein 交往。
NP-40 緩衝 有一個更低的deanturing 的級別, 和因而被使用為phosphorylation 實驗譬如看kinase 活動。並且NP-40 被使用為蛋白質蛋白質交往。NP40 是一種非離子洗滌劑, 和是最常用的洗滌劑在電池病勢漸退緩衝為immunoprecipitation 和西部汙點。
preclear 步驟通常完成為immunoprecipitation 因為它降低相當數量未指明的蛋白質在電池lysate 。此外, 前結算並且取消抗體約束蛋白質的也許有可能的未指明的交往和高親合力為蛋白質A, 蛋白質G, Immunoprecipitin, Zysorbin 的蛋白質 , 或任何不能溶解的表單您使用對拉下來您的抗體。一些研究員查找這個步驟多餘和跳過這個步驟。嘗試前結算第一次您嘗試immunoprecipitation 。如果您的結果是相當清楚的, 設法跳過前結算下個實驗和看見怎麼它結果。
哪抗體您應該使用為immunoprecipitation? 通常Polyclonal 抗體被使用為immunoprecipation 。
抗體抗原複雜獨自不不能溶解, ie. immunoprecipitation, 不是一個完全想法。抗體和他們的捆綁對抗原是可溶解在血液, 緩衝, 和在immunoprecipitation 實驗期間。 什麼使用沉澱在這些複雜之外是不能溶解的抗體約束蛋白質。蛋白質A 和G, 與細菌被隔絕了, 和束縛對抗體的恆定的區域。
不能溶解的抗體約束蛋白質實例□去□常沉澱複雜在immunoprecipitation 是:
洗滌複雜做使用RIPA, PBS, IP 洗滌緩衝, 或其它緩衝根據什麼您�&想分析在IP 以後。RIPA 緩衝更加嚴密但是PBS 較不嚴密。
Immunoprecipitation 成功依靠抗體的親合力為其抗原。 好immunoprecipitation 抗體將給您低背景當您分析範例使用其它技術在IP 以後。 不能溶解的抗體束縛的蛋白質被使用並且非常重要。Polyclonal 抗體是最佳的抗體使用然而被淨化的monoclonal 抗體可能並且被使用。 檢查您的抗體供營商看如果您的monoclonal 抗體被測試了為immunoprecipitation 。
| 線程數 | |||
| 線程數稱謂/海報 | 前筆過帳 | 回復 | 視圖 |
| 07-07-2008 下午08:46 | 3 | 1220 年 | |
| 01-01-2008 下午11:35 | 1 | 498 | |
| 12-22-2006 下午03:07 | 7 | 1968 年 | |
| 07-17-2007 下午08:15 | 1 | 686 | |
| 07-17-2007 下午08:08 | 3 | 908 | |
| 01-22-2008 上午11:03 | 0 | 566 | |
Immidiate dissappearing 範圍在DNA 程式化膠凝體在銀弄髒的
喂一個我的朋友面對有銀色弄髒的一個問題程式化之後形成膠凍在哪些DNA 範例範圍與標記一起範圍是...
二個嚴密移居範圍在SDS-PAGE 形成膠凍
你好。我現在不為什麼僅我看見二個接近的移居範圍在膠凝體sds 頁為什麼二個範圍非常緊密? 通常我沒有得到二個範圍, 通常一個範圍...
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我不喜歡煮沸我的範例當我得到蛋白質綜合並且運行在膠凝體的頂層附近如果您使用特定dyes/probes 您要... 的等
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在隔夜風險設法檢測低豐盈蛋白質, 我的膜變乾在邊緣附近因此我rewet 它在甲醇裡... 是我的Ab 沒有...
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