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蛋白質和抗體Microarray 芯片
獲取分子和他們的限制
分析蛋白質列陣的最公用的表單是抗體的抗體microarrays (或抗體仿造物) 那困境特定抗原排列在一個載玻片在高密。lysate 通過在列陣並且一定的抗原被檢測在洗滌以後。最大的挑戰以這些方法生產辨認蛋白質利益和以高足夠的特異性在高生產量時�&的試劑。 雖然抗體是選擇傳統試劑為檢測蛋白質在複雜混合物, polyclonal 清液經常不是特定和是昂貴生產。並且, 生產高特定monoclonal 抗體常規hybridoma 方法是費時, 費力和昂貴(8) 。
幾研究使用抗體最近進行了儘管阻礙在獲得特定抗體。 在最大的研究的當中一個中迄今, Sreekumar 等察覺146 分明抗體在玻璃監控蛋白質數量的�&更在LoVo 冒號癌電池裡。他們的結果顯露了許多有趣的蛋白質的幅射線導致的管理規定, 包括p53, DNA 分段存儲系數40 和45, 腫瘤壞死與系數相關的ligand, 並且下來被調控的蛋白質(58) 。
迄今, 多數抗體microarrays 導致了與幾十二或幾百商業可利用的多或mono-clonal 抗體。 雖然成千上萬抗體是商業可利用的, 這個編號是不足的因為為多數蛋白質沒有可利用的抗體。 情況許多抗體是葡基化的和包含大protein-based 支撐結構意味, 他們經常交叉起反應與超過一目標蛋白質。 這可能對很大數量假的正貢獻(9) 。 如此其它問題獲得高特異性抗體。
一個有抗體列陣的最巨大的問題是特異性。蛋白質經常是存在在一個非常大力學範圍(106); 因而, 也許有高親合力為一蛋白質的試劑, 但是低親合力為另更將陳列更低的親合力蛋白質的檢測如果它是更加流行(9) 。一個組調查了115 很好被描繪的抗體抗原成對的–能力起反應在高密度microarrays 在被修改的載玻片。30% 成對顯示了期望的線性關係, 表明, 抗體的分數是適當的為定量分析(33) 。許多組使用三明治檢驗避免這個問題。 三明治檢驗由察覺第一抗體在列陣和然後檢測執行使用認可蛋白質的一另外部份的第二抗體。這個途�&巨大增加抗原檢測的特異性, 但要求, 最少二優質抗體為各抗原存在被檢測(8) 。
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