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蛋白質和抗體Microarrays
目錄
竟管最近推進在對分子生物學的我們的瞭解, 我們在許多情況下無法牽連特定蛋白質以疾病。 Genomics 和microarray 技術允許我們一次分析千位mRNAs 和確定是否mRNA 表達式被更改在疾病狀態。 但是, 研究員長期知道, 一mRNA 的濃度在電池之內窮地被關聯以實際豐盈那蛋白質(1,2,3) 。 這歸結於情況各自的mRNAs 的退化的費率和蛋白質不同, 過帳transcriptional 控制蛋白質轉換(4), 蛋白質(5) 的一定數量的過帳transcriptional 修改, 和蛋白質退化由解朊作用(6) 。
由直接地評定相當數量特定蛋白質, 我們評定基因功能的一個真實的級別。 但是, 當你考慮到很大數量的過帳平移修改, 人類細胞也許包含百萬或更加不同的蛋白質變形, 任何能被修改在疾病做任務分析所有一個巨大的任務。 蛋白質microarrays 或蛋白質芯片也許考慮到解決方法對這個問題。 幻燈片或"芯片" 能被察覺以千位知道的抗體或peptides 像DNA microarray, 一個生物範例延長了芯片, 和任一捆綁被確定。 束縛能並且被分析使用標準proteomic 技術譬如時間飛行質量光譜(女士) 並且peptide 質量fingerprinting 。 蛋白質芯片可能因而成為描出蛋白質變化一個快速和高生產量方法在疾病上。(7)
蛋白質芯片有潛力起作用在許多其它申請包括蛋白質蛋白質, 蛋白質–藥物交往、–DNA 蛋白質交往、蛋白質本地化、抗原抗體交往、enzyme-substrate, 和也許是amendable 排列類型高生產量審查的感受器官ligand 交往的研究(7,8) 。
二個途�&使用為了描繪多蛋白質在一個生物範例。 第一途�&是2-dimensional 膠凝體電泳法, 由切除和確定廣泛應用分離和形象化2000-10,000 蛋白質在一個唯一實驗由質量光譜((9) 女士) 。 這個方法是費時和與女士, 只有最豐富的蛋白質可能被檢測。 並且, 增殖率疑難, 即使預鑄的膠凝體和常用的試劑、協議, 和硬體元件導致了改善的性能(17) 。 由於3D 膠凝體分離技術的限制, 增長的注意集中於第二個途�&的發展, 蛋白質microarrays 的發展作為替代和補全途�&(10-12) 。
理論背景為蛋白質基於microarray 的ligand 約束檢驗由Ekins 等首字母開發了在80 年代(13-16 晚期) 。 根據設計, 抗體microarrays 比常規審查方法不僅�&允許analyte 盤區的同時審查, 但並且敏感和迅速。 興趣在審查大蛋白質集上只出現了由於成績在genomics 由DNA microarrays 和人的染色體項目(17) 。
第一列陣途�&嘗試小型化生物化學和immunobiological 檢驗通常執行在96-well microtiter 板材(18-19 裡) 。 96-well 抗體列陣第一次被創建了以144 個要素每個為標準酵素被鏈接的免疫吸附劑檢驗(ELISAs) (20) 。 相似的列陣使用評定攝護腺特定抗原(PSA) 並且cytokines (21) 。
補白膜首字母也被使用了由於他們的優越蛋白質約束能力。 他們主要被探查了與抗體使用ELISA 技術。 低密度一些48 被淨化的蛋白質被介入在副本被開發了為蛋白質的特定交往的調查以radiolabeled DNA 、核糖核酸、ligands, 和其它小化學製品(22) 。 一個基於膜的高密度列陣被開發了為篩選一個人的胎兒腦子DNA 表達式圖書館包括37830 克隆的目的。 被淨化的蛋白質被察覺了PVDF 膜在密度300 samples/cm2 (23) 。 其它補白根據了列陣被修建了但限制是低分辨率和可觀的背景使它難使用他們在申請以限制範例數量譬如蛋白質表達式描出腫瘤切片檢查法。
蛋白質列陣減弱蛋白質或抗體圖書館被固定在第2 可尋址的網格在芯片(參見圖1) 。 蛋白質microarray biochips 提取和保留目標從液體媒體和是分明從microfluidic biochips, 分開和處理蛋白質在運輸媒體 在原處 使用microfluidic 設備(24,25) 。 一個典型的列陣也許空間地包含103-104 個分明要素在一個總面積1 cm2 之內(26) 。
其次: 類型抗體和蛋白質芯片
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