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版權2006 年MolecularStation
Polymerase 鏈式反應- PCR
目錄:
PCR 曾經將被替換嗎? – Helicase 依賴放大作用(HDA)
超過30 年前, 重組脫氧核糖核酸技術的簡介如同為生物科學的一個工具革命化了生活的研究。 分子克隆允許生物各自的基因的研究; 但是這個技術依靠獲得相對地很大數量純淨的DNA 。 這取決於質粒或其它傳染媒介DNA 的複製在微生物期間細胞分裂(1) 。 研究員查找了它極端費力和難獲得一特定DNA 在數量從基因質量出席在一個生物範例(2) 。 重組脫氧核糖核酸技術使第一分子分析和產前診斷成為可能幾種人的疾病。 胎兒DNA 由羊膜穿刺術採樣獲得能被限制酵素消化、電泳法、南部的調用和雜交分析對一個被克隆的基因或oligonucleotide 探針(3) 。 但是, 南部弄髒允許了基本只映射基因在無關的單個(4) 。
PCR, 一個首字母縮略詞為Polymerase 鏈式反應(5,6), 提供了生產很大數量一特定DNA 從一塊複雜DNA 模板在一種簡單enzymatic 回應。 PCR 是一個最近被開發的程式為DNA 的 體外放大作用。 PCR 變換了幾乎所有學習要求DNA 片段操作也許執行作為其簡單和有用性(7) 的結果的方法。
在80 年代, Kary Mullis (圖1) 和小組研究員在Cetus
Corporation 在Cetus Corporation 設想了方式開始和終止polymerase 的活動在特定點沿DNA 一條唯一子線。 Mullis 並且意識到, 由利用分子再生產技術這個要素, 目標DNA 能指數地放大。 這個DNA 放大作用程式根據一個體外而不是一個活體內進程(5,6,8) 。 無細胞DNA 放大作用由PCR 能簡化許多標準程式為克隆, 分析, 和修改的核酸(1) 。 隔絕DNA 一個特定片斷的早先技術依靠基因克隆 – 一個繁瑣和緩慢的程式。 PCR, 另一方面Kerry Mullis 陳述 “讓您採摘DNA 片斷您’關於感興趣和有一樣其中許多當您要” (2,8)
。 當其它Cetus 科學家最終成功做polymerase 鏈式反應正如渴望執行在可靠的時�&, 他們有重要提供精確基因分子生物學家和其他人的無限的數量的 一個 巨大地強有力的技術必須為他們的工作(8) 。 從第一報表in1985, 超過5000 篇科學論文在1992 年(1) 以前發布了。 此外, 很大數量的發行當然使它不可能覆核對PCR 技術的發展和申請的所有重要攤繳; 但是我們將嘗試覆核這裡最重要的發展在基本的PCR 實踐。
PCR 被認為由Kerry Mullis 博士設想在1983 當工作在Cetus Corporation 在Emeryville, 加州。 但是, 1971 年一些作早期工作在的工作由Gobind Khorana 並且完成了誰描述了複製DNA 片斷的一項基本原則使用二底漆。 進展由更加雷管的綜合和polymerase 洗淨問題然後限制了(9) 。 在Mullis’s 頭裡, 發明增長從一份理論計劃進行有限dideoxynucleotide 程式化唯一人的基因使用綜合oligonucleotides 為診斷的公用人的疾病變化的目的。 對這樣一個直接程式化的方法的明顯的阻礙是人的染色體(3.3 X 109 基本的成對的) 高複雜。 因而, 第二oligonucleotide 或底漆被添加阻攔第一底漆的綜合的累進。 以後然而, 這第二底漆被包括束縛對另一DNA 子線, 以便突變體等位基因的各條子線對最後的信號�&貢獻。 如果計劃介入底漆的同時雜交對各條子線被加熱混合物和然後重複修改了燜火和擴展名步驟, 主要信號然後�&是增加的更加進一步。 重複步驟�&使第一舍入的產品被複製在第二個循環, 產生二複製。 重複循環再導致�&複製, 和cetera。 幾個星期通過了在這個好主意被嘗試了(8) 之前。 二底漆被綜合是完全補全對各個人的b-globin 基因的一個被克隆的細分市場的110 基本的成對區域的結尾, 放大作用執行了, 並且產品由acrylamide 膠凝體電泳法辨認了。 最終結果是被期望的110 基本的成對DNA 片段和PCR 期初作為一個基本的技術在分子生物學(5,6) 。
在Mullis 的原始PCR process(5,6,8), 酵素在試管內 被使用了 (在一個受控環境裡在有機體之外) 。 double-stranded DNA 被分離了入二條唯一子線由加熱它對96.C 。 在這個溫度, 然而, E.Coli DNA polymerase 被毀壞了以便酵素必須被重新補充在各個循環以後熱化階段。 Mullis 的原始PCR 進程是非常無結果的因為它要求了很多時期、浩大的數量DNA Polymerase, 和連續關注在PCR 進程過程中。
PCR 放大作用結構的考試顯露其簡單而且其高雅(圖2) 。 Oligonucleotide 底漆首先被設計是補全對順序的結尾被放大, 和然後被混合在槽牙超額與DNA 模板和deoxyribonucleotides 在適當的緩衝。 隨後而來的熱化弈質原始子線和冷卻促進更加雷管的燜火, oligonucleotides 各困境對目標片段的一條另外子線。 底漆被安置以便當每個由DNA polymerase 的活動延伸, 新建被綜合的子線將重�&相反oligonucleotide 的束縛位置。 當變性、燜火, 和polymerase 擴展名的進程繼續底漆一再束縛對原始DNA 模板和補全站點在新建被綜合的子線和被延伸導致DNA (圖3) 的新建複製。 最終結果是在的DNA 片段的總數的一個指數增量包括順序在PCR 底漆之間, 代表最終在2n 理論豐盈, n 是循環(1,7,13 的) 數量。
DNA polymerase 是自然發生的酵素, 摧化DNA 形成和維修服務的一個生物大分子。這有效在束縛對一條唯一DNA 子線和創建一條補全子線旁邊。 所有生存問題的準確複製取決於這個活動, 它起作用複製DNA 當電池劃分(10,11) 。 只在最近把科學家學�&操作這個活動和嚮科學研究申請它。 最早期的PCR 實驗utlilized 大腸埃希氏菌DNA polymerase I 的Klenow 片段在溫度37C 放大特定目標從人的genomic DNA (5,6) 。 經常這些PCR 回應生產了未完成純淨的目標產品依照由膠凝體電泳法(1) 判斷。 這些首字母PCR 放大作用以Klenow
片段不是高特定(5,6) 。 雖然一個唯一DNA 片段能是被放大的~200,000 摺�&從genomic DNA, 只有大約1% PCR 產品是被瞄準的順序(13) 。 一根特定雜交探針必需分析被放大的DNA (5,6) 。
某一PCR 情況被確定增加更加雷管的雜交銀根緊譬如更低的氯化鎂含量和更高的燜火溫度。
此外, 酵素和底漆的濃度, 燜火時期、擴展名PCR 的時間, 和編號循環全部被發現影響PCR
的特異性。
並且, 一個特定順序的濃度在範例可能並且影響PCR 產品(1,7,13,14,15 的) 相對同質性。 Deoxyribonucleotide triphosphates 和鎂在適當的緩衝是還重要配料為PCR 。 PCRs 效率和特異性可能由在自由鎂、deoxyribonucleotide triphosphates, 和底漆上濃度和比率變化影響。 這些試劑必須被優選為了達到高特異性和產生(14) 。 它由polymerase 鏈式反應(15) 並且發現了溫度和oligonucleotide 底漆長度的放大作用作用在特異性和效率。
大腸埃希氏菌DNA polymerase I 的Klenow 片段的鈍化作用在高溫必需為子線分離要求了酵素的添加在變性步驟各個循環以後(5,6) 。 在1988 年之前, 任何人�&辦PCR 回應程式由一系列的水浴或加熱的塊迫使耐心地坐和添加一個新整除數 E.Coli DNA polymerase 在各個變性步驟以後, 由浸沒典型地執行回應船在開水裡為½ 一分鐘對3 分鐘(7) 。 這個相當繁瑣步驟被一耐高溫的DNA polymerase 曾經消滅了, Taq DNA polymerase (12) 的簡介, 在PCR 回應的開始。 增長在超出110C 噴泉DNA polymerase 活動的耐高溫的屬性與Thermus aquaticus (Taq) 被隔絕了(圖4), 和對polymerase 鏈式反應很大地貢獻了(1,7,12 的) 產量、特異性、自動化, 和實用程式。 Taq 酵素可能承受被重複的熱化對94C 並且每次混合物冷卻允許oligonucleotide 底漆束縛催化劑為擴展名已經如此是存在(1,7) 。 但是, 更高的燜火溫度未被設立直到PCR 發展 “(8), 洗淨和一” 抗熱DNA polymerase 的商業配電器的唯一最重要的發展從喜溫的細菌 Thermus aquaticus (Taq) (12) 。
一抗熱DNA polymerase 的隔離並且允許更加雷管的燜火並且擴展名被執行在被�&起的溫度(1,7,12,13), 因此減少配錯了燜火對nontarget 順序(未指明的放大作用) 或增長的特異性。 這樣, 為了許多放大作用PCR 產品能被檢測作為一個唯一ethidium 溴化物被弄髒的範圍在一個電泳膠凝體(12) 。 這種增加的特異性並且增加了目標順序的DNA 產量。 而且, 更加長式的PCR 產品能被放大從genomic DNA, 大概由於對模板子線的附屬結構的減少在被�&起的溫度被使用為更加雷管的擴展名。 上部範圍限額為Klenow 片段polymerase 放大作用是只關於400bp 。 Taq polymerase 和其它耐高溫的polymerases 綜合了片段10 kb (1,7,12,13) 。 Taq polymerase 的 可用性 很大地並且簡化了回應的自動化照原樣一個更加容易的任務修建將循環回應管通過不同的溫度比製造設備�&進行thermocycling 和酵素整除數的添加的用具。 有商業當前thermocyclers 巨大品種可利用。 這發展由科學界是一個重大系數在這技術的迅速申請(7) 。
除也許由PCR 形成double-stranded, 直言結束的DNA 片段的生產之外, PCR 的二個其它功能策劃對PCR 的實用程式很大地貢獻。 首先, 底漆的捆綁的位置定義被放大的片段的限定範圍並且因此限制endonuclease 認識站點的前期分子克隆需求不必需為PCR 。 因為唯一DNA 順序的一個有限的編號是限制站點, PCR 很大地增加片段範圍和構成選擇的靈活性。 第二, 它不是必要為PCR oligonucleotides 確切地是補全對模板DNA 。 “尾巴” 也許被添加來底漆的’ 5 末端介紹順序在也許因而被剝削介紹限制endonuclease 認識站點或其它有用的順序譬如變化入被放大的DNA 的飛沫站點之內。 這現象允許PCR 誕生作為一個方法為迅速DNA 克隆(1,7,13) 。
分子克隆受益於PCR 誕生作為技術。 直接克隆第一次被�&辦了使用一個110 bp DNA 片段由PCR 放大並且包含的oligonucleotide 底漆限制endonuclease 認識站點添加了來他們的5 個’ 末端。 這些站點被使用促進被放大的DNA 的克隆入M13 質粒(17) 。 110 bp 片段並且程式化證實, 這個途�&是一個迅速可靠的途�&對克隆。 (圖5)
Cell-based DNA 克隆介入DNA 複製 in-vivo, 同複製非常高精度聯繫在一起由於校對結構。 但是, 當DNA 被複製 在試管內 和與PCR, 複製的誤差率是可觀地更加偉大的。 廣泛被應用的polymerase, Taq DNA polymerase 然而, 沒有伴生的3’到5’ exonuclease 商談一個校對的功能。 因而誤差率由於基本的misincorporation 在DNA 複製期間是相當高為 Taq: 為接受複製的20 個有效循環的一1 kb 程式化, 大約40% 新建DNA 子線由PCR 綜合使用這酵素將包含一不正確nucleotide 起因於一個複製的錯誤(16) 。 所以, 既使PCR 回應介入一個唯一DNA 順序的放大作用, 最終產品將是混合物幾乎符合, 但不相同DNA 順序。 儘管錯誤由於複製 在試管內, DNA 程式化總PCR 產品也許給正確順序由於這樣的事實不正確基礎的並網重要任意並且一個不正確基礎的攤繳在一個或更多子線由攤繳淹沒從將有正確順序的巨大的多數子線。 但是, 如果PCR 產品將被克隆在電池裡, 幾各自的克隆也許需要程式化為了確定正確(公眾輿論) 順序, 在�&辦的進一步實驗之前。
最近, DNA 複製的無宗教信仰的問題在PCR 回應期間被使用可觀地減少了關聯了3 到5 exonuclease 活動’ 的替代熱穩定的’ DNA polymerases 。 Pyrococcus furiosus (Pfu) DNA polymerases 和 Thermococcus Litoralis (出氣孔) 成為更加廣泛使用由於校對由他們伴生的3 到’ 5 exonuclease’ 活動(18) 商談。 Pfu 收效的PCR 產品例如, 有變化底層被複製介紹錯誤: 為接受複製的20 個有效循環DNA 的一個1 個kb 細分市場, 大約3.5% DNA 擱淺在產品運載一個修改過的基礎(16) 。
新建途�&改進特異性被開發了根據了認識, Taq DNA polymerase 保留可觀的enzymatic 活動在溫度很好在最佳之下為DNA 綜合。 因而, 底漆non-specifically 鍛煉對一個部分唯一擱淺的模板區域可能是延長的在回應到達72.C 為特定鍛煉的底漆擴展名之前。 如果DNA polymerase 被激活在回應到達了高(之後> 70.C) 溫度, 非目標放大作用可能減到最小(19,20) 。 這個 “熱起動” 途�&可能由一種重要試劑的手工添加完成對選擇管在被�&起的溫度。 ssDNA 約束蛋白質的添加並且被報告增加特定放大作用。 一個更加用戶友好的途�&將使用或DNA polymerase 的禁止或鈍化作用。 二類型Taq DNA polymerase 的禁止被嘗試了包括oligonucleotide 禁止(21) 和抗體(22) 禁止。高兩Taq DNA polymerases 特定oligonucleotide 抗化劑被生產了。 這些有選擇性地禁止DNA polymerase 活動在溫度在40.C 之下和被顯示了對功能在熱起動申請。 替代, 你可能使用抗體反對Taq DNA polymerase 。抗體禁止DNA polymerase 直到PCR 的溫度是這樣抗體被弈質在溫度大於55.C, 因此發行酵素。 有不利對這類型熱起動情況。 在這種情況下, 你需要抗體為各另外酵素被使用在PCR 並且為很大數量的PCRs 這可能極大上升費用。 熱起動的最方便的表單將修改DNA polymerase 在這種情況下它是非活動在室溫(溫度敏感突變體), 並且只恢復活動跟隨孵出在95.C 6-15 分鐘(23) 。
由於其簡單, PCR 是一個普遍的技術以一個寬應用範圍
包括直接順序, genomic 克隆、感染微生物的DNA 鍵入, 檢測, 站點被指揮的mutagenesis 、產前基因疾病取決於重要方法的三主要好處對allelic 順序差異的研究, 和分析(1,7,13,16):
速度和易用: DNA 克隆由PCR 可能執行在相對地短的時間, 在幾時數之內。 通常, PCR 回應包括大約30 個循環各個循環包含變性, 綜合和reannealing 步驟, 用一個單獨循環典型地需要3
5 分鐘在一自動化的熱量cycler 。 這比需時清楚地快速為cell-based DNA 克隆, 能需要幾星期時間。 此外, 它相當容易設置PCR 回應並且對thermocycler 設備的用途還容易。 某個時候必需為oligonucleotide 底漆設計和綜合, 但這由電腦軟體的可用性為更加雷管的設計和自定義oligonucleotides 迅速商業或學術綜合簡化了。 PCR 情況的優化也許必需譬如更加雷管的燜火溫度、鎂含量, 和更加雷管的濃度。 但是, 的梯度PCR 設備創建允許各種各樣的更加雷管的燜火溫度同時被測試很大地減少了需時為這個步驟。 優選的條件為回應一次被獲得了, 回應可能簡單然後被重複(1,7,13,16) 。
敏感性: PCR 是能放大順序從詳細的數量目標DNA, 甚而DNA 從單細胞(24)
。 這樣精妙的敏感性買得起學習分子發病原理新建方法和查找了許多申請在法醫學,
在診斷, 在基因聯結分析使用唯一精液鍵入和在分子古生物學研究中, 範例也許包含電池的詳細的編號。但是, 方法的極端敏感性意味, 巨大必須由external DNA 保重避免範例的汙穢在調查之中, 譬如從詳細的相當數量電池從運算符(1,7,13,16) 。
強壯: 核酸來源的一個寬廣的範圍是適當的模板為PCR 放大作用。 被淨化的DNAs 從各種各樣的種類和來源被放大了。 PCR 可能允許特定順序的放大作用從裡DNA 被貶低或非常被埋置在媒體常規DNA 隔離是疑難的物料在。結果, 它再是非常適當的為分子人類學並且古生物學學習, 例如對DNA 的分析從考古學遺骸的被收回。它成功並且使用得放大DNA 從甲醛水固定或石蠟嵌入組織樣品, 有重要申請在分子病理學和基因聯結, 在某些情況下, 學習。 通常, PCR 放大作用的成功是最偉大的當目標片段是相對地豐富的(1,7,13,16) 。
儘管其巨大的大眾化, PCR 有某些限制作為一個方法為有選擇性地克隆特定DNA 順序。
為了修建允許一個特殊DNA 順序的有選擇性的放大作用的特定oligonucleotide 底漆, 一些前期順序資訊通常是必要。 這正常意味, DNA 地區利益早先部分被描繪了, 經常以下前期cell-based DNA 克隆。 但是, 減少甚至排除需求對於前期DNA 順序資訊關於目標DNA 的各種各樣的途�&被開發了。 早先uncharacterized DNA 順序可能有時被克隆使用PCR 與退化oligonucleotides 如果他們是基因的成員或重複性DNA 系列至少成員的當中一個早先被描繪了。 在某些情況下, PCR 可能有效使用沒有任一前期順序資訊關於目標DNA 允許DNA 順序的indiscriminateamplification 從是存在以extemely 有限的數量DNA 的來源。 所以, 雖然PCR 可能被申請保證整體染色體放大作用, 它沒有cell-based DNA 克隆好處在提供分離各自的DNA 克隆方式包括一個genomic DNA 圖書館。
相當數量PCR 產品被獲得在一種唯一回應比是並且限制可能被獲得使用cell-based 克隆稱細胞培養的數量的金額可能的。PCR 回應的效率將變化從模板到模板和根據必需優選回應但典型地唯一比較少量產品達到的各種各樣的系數。
雖然PCR 理論產量是指數的, PCR 的實際利潤率表明, 計劃運行與較少比其最大潛在。 例如, 相當數量產品在各個循環最終成水平。 這個高原也許由以下現象解釋。 首先, 一些模板也許從未可利用歸結於子線DNA 的中斷或故障對離解從其它大分子在洗淨和首字母thermocycles 期間。 第二, 數量酵素有限並且活動也許最終減少。 第三, 因為double-stranded 產品的濃度到達高水平, 競爭增加在模板(PCR 產品) 燜火對底漆和reannealing 補全模板子線之間(1,7,13) 。
PCR 明顯和許多時間偉大的不利作為DNA 克隆方法是可能被克隆DNA 順序的範圍範圍。 不同於被克隆的DNA 順序的範圍可能接近2 Mb 的cell-based DNA 克隆, 被報告DNA 順序由PCR 克隆典型地是在0.1
5 kb 範圍範圍, 經常在這個縮放比例的末端。 DNA 的小片段可能由PCR 容易地通常放大, 然而它變得越來越更難獲得高效率的放大作用當渴望的產品長度增加。 巴恩斯(25) 認可了目標長度限制對DNA 的PCR 放大作用。 他使用了一個高水平無exonuclease, N 終端刪除突變體的組合Taq DNA polymerase, Klentaq1, 以一耐高溫的DNA polymerase 的一個非常低水平陳列3'-exonuclease 活動(Pfu 、出氣孔, 或深刻的出氣孔) �&辦高精度長式PCR 。至少35 kb 噬菌體lambda 可能被放大對高產量從1 ng lambda DNA 模板。 對這個方法的用途產生了增加的基礎成對保真度、能力使用PCR 產品作為底漆, 和最大產量目標片段。 其它情況被辨認了為更加長式的目標的有效放大作用, 包括22 的放大作用beta globin 基因字符串的kb 從人的genomic DNA 和42 kb 從phaga lambda DNA (26) 。 條件為這長式PCRs 包括了增加的酸鹼度, 丙三醇和二甲基sulfoxide 的添加, 被減少變性時間, 被增加擴展名時間, 和擁有a 3' 對5'-exonuclease 對一附屬耐高溫的DNA polymerase, 或"校對的使用," 活動。 "長式PCR" 協議維護了特異性必需為目標在genomic DNA 裡由使用polymerase 的更低的水平和溫度和鹽情況為特定底漆燜火。 能力放大DNA 順序10-40 kb 將帶來PCR 速度和簡單給genomic 映射和程式化和將促進研究在分子遺傳學(26) 。 通常, 條件為長距離PCR 介入修改的組合對標準條件的以二polymerase 系統。 這提供DNA 擔當一個校對的結構’的polymerase 和’ 3 到5 exonuclease 活動的優選的級別(16) 。
自動調控的Thermocyclers 1986 年溫度為PCR 循環被介紹了(圖6) 。 除預付款之外在PCR 試劑, 新建票據為自動化的上升暖流循環和為分析PCR 產品被發展了。 新建熱量cyclers 增加了熱化的費率, 冷卻, 和熱傳遞到被修改的回應船。 回應船由第一代熱量cyclers (甚至水浴和熱化塊) 容納是標準塑料microfuge 管。 PCR 放大作用在稀薄的血絲管裡允許迅速熱量循環, 和DNA 綜合對20s 。 溫度變化的速度達到在這些系統允許溫度最佳的精確定義為各個單獨步驟在PCR 循環。 新建生成熱量cyclers 容納更多範例, 有更加精確的熱量配置文件, 和並且是可編程式的(13) 。
對PCR 的普遍申請的最少被讚賞的攤繳的當中一個是可靠的自動化的化學的發展為oligonucleotide 綜合。 近來, 一唯一oligonucleotide 的建築是能由一位熟練的有機化學家只執行的一個堅固任務。 現在它是可能採購或者可能由技術人員或oligonucleotides 管理從一個商業或學術來源的oligonucleotide 合成器。 複合oligonucleotide 綜合設備被修建了以減少綜合(27,28 的) 整體費用的目標。 因為oligonucleotides 定義最後的PCR 產品, 毫無疑問在沒有他們的準備好用品時, PCR 不�&享受它今天獲得了的寬支持(13) 。
研究員在初期同意, PCR 底漆設計是困難和不可靠的。 電腦程式構想考慮所有設計標準。 第一程式的當中一個被寫為更加雷管的設計是利用數字式研究寶石的Olga (圖像環境經理的) 實施在Atari ST (29) 。 Olga 特定適合了與polymerase 鏈式反應(PCR) 允許對二個更加雷管的順序的同時分析。 Olga 好處是, 它提供了在一程式分析為直接重複、附屬結構和更加雷管的二聚作用以及為工作流程的幾個有用的' 精整' 工具參與PCR 優化和oligonucleotide 綜合。 Primer3 程式在Whitehead 學�&現在認為是最可靠和最多才多藝的工具現在可以得到(30) 。
PCRs 可能現在執行啟用DNA 片段的放大作用由幾kilobases 決定在長度在超過一百萬次以前他們的首字母豐盈。 程式是高automatable 和需要幾時數從開始thermocyling 對產品分析。 這早先不是實際情形, 並且執行PCR 的實用需求很大地被簡化了從方法(13 的) 第一原稿。 今天, PCR 的大多首字母栓或無效用解決了(8) 。 此外, PCR 擴展包括超過270,000 個條款(31) 。
Polymerase 鏈式反應是廣泛被應用的方法為 它 要求熱量變性或thermocycling 分離二條DNA 子線的體外DNA 放大作用然而。 In-vivo, DNA 由DNA polymerases 複製與各種各樣的輔助蛋白質。 DNA helicase, DNA polymerase 輔助蛋白質行動分離雙重DNA 在電池裡面。 Vincent 等。(32) 由仿造構想了 一個 新建體外等溫DNA 放大作用方法 活體內 複製結構。 Helicase 依賴放大作用(HDA) 運用一DNA helicase 生成唯一擱淺的模板為更加雷管的雜交。 隨後底漆擴展名由DNA polymerase 然後摧化。 HDA 不要求一昂貴的thermocycler 並且PCR 也許因而執行實際任何地方。 另外, 它提供幾好處在其它等溫DNA 放大作用方法由有一份簡單回應計劃和是可能執行在一個溫度為整個過程的一種真實的等溫回應。HDA 提供巨大承諾在簡單便攜式的DNA 診斷設備的發展被使用在領域和在點關心(32) 。
它說最簡單和最方便的方式定義PCR 是作為 技術。 但是, 這樣範疇多年來消滅PCR's 發展的歷史記錄許多單個對想法貢獻在PCR 的理論和優化技術之後。 下個簡單答復將說出單個名字作為polymerase 鏈式反應的發明者。 1993 年Karry Mullis 被授予了諾貝爾獎為化學為在PCR 的他的發現上。 但是, 這個發現比賽在許多科學家之中, 也許對打開貢獻了這個難題。
它並且說, PCR 沒有存在直到它使工作在一個實驗系統。 鑒於此, 概念的想法不僅僅是充足的; 概念一定成功被投入了入實踐(33) 。
雖然有疑義至於PCR 的最後創建者, 和疑義至於可能性PCR 可以以某種方法或某時被替換, 有一點疑義PCR 創建了在一個短時間間距在分子生物學和生活的研究的影響。
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