Bioinformatics, 協議, DNA 核糖核酸蛋白質Proteomics
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推遲您的想像力, 當您推遲您的大衣, 當您進入實驗室。但再投入它, 當您穿上您的大衣, 當您離開。~Attributed 對克勞德·Bernard (法國生理學者1813-1878)
Maxam-Gilbert 程式化以DNA 這個方法程式化而不是綜合DNA 在試管內和終止綜合回應與鏈終止者, 這個方法開始與全長, 末端被標記的DNA 和劈開它與基本的特定試劑。如此怎麼這個方法運作以氨基¥尿環基礎, 僅同樣原則適用於所有�&個基礎; 首先我們結束標記我們想要程式化的一個DNA 片段。
這可能是5’- 或3’- 結束標記。其次, 我們修改一种基礎。這裡我們使用二甲基sulfate (DMS) 甲基化氨基¥尿環。(實際上, 這種試劑並且甲基化adenines, 但不是用方式那導致DNA 子線卵裂。) 和在鏈終止方法, 我們不想要影響每氨基¥尿環, 或我們將導致唯一不�&允許我們確定DNA s 順序’的微小的片段。所以, 我們做甲基化在導致平均數僅僅一甲基化的氨基¥尿環每DNA 子線的溫和條件下。其次, 我們使用做二件事的一種試劑(piperidine): 它導致甲基化的基礎的損失, 它然後傷DNA 中堅在失去的基礎(apurinic 站點的) 站點。在這種情況下, G 在順序中間甲基化了, 因此子線破損那裡發生了, 生產被標記的三聚合物。
在其它DNA 分子裡, 第一G 不能甲基化, 提升被標記的磷酸鹽(基礎和糖�&丟失在化工卵裂) 。終於, 我們electrophorese 產品和檢測他們由自動射線照像術, 正在鏈子終止方法。當然, 我們需要運行劈開在其它三個基礎的三種其它回應。有幾個方式做這。例如, 我們能減弱glycoside 債券對腺嘌呤和氨基¥尿環與酸; 然後piperidine 將導致depurination 和子線破損在兩個和和Gs 以後。如果我們electrophorese 這A + G 回應在G 唯一回應旁邊, 我們能獲得和由比較。同樣, 聯氨打開thymine 和胞嘧啶圓環, 並且piperidine 可能去除這些基礎和然後中斷DNA 子線在收效的apyrumidine 站點。在1M NaCl 面前, 聯氨是特定為胞嘧啶唯一, 因此我們能運行這種回應在C+T 回應旁邊和獲得茶匙由比較。
版權分子崗位2006 年
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