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科學自殺當它採取一個信條。~Thomas 亨利·Huxley
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"化工, 像所有其它活細胞, 微生物包括有機和無機氮氣和礦物鹽; 它是因此必要為了生長微生物, 那物質這些三組使可利用, 與氧氣一起, 重要對所有生存結構壽命。最後某一相當數量濕氣是absolutely 必要的。" (Besson 。)
食物為微生物增長準備被給一般用語營養素媒體。很大數量的微生物欣然將增長在或在容易地可利用的營養媒體, 作為牛奶、肉湯, 等。一些microorgan isms 有廣泛不同的食物需求和需要為增長營養媒體廣泛不同在他們的構成裡。
但是, 有必須被運用在所有營養媒體準備至於對微生物的使用的幾個一般規則。這些是簡要, 那:
每個培養基必須
營養媒體的分類
培養基也許被分類和:
I. 自然媒體像發生在本質裡, 即, 牛奶、土豆和其它蔬菜、肉和肉製品、血液和血液清液、蛋、土壤, 等。
II 。準備的媒體, 即, 被做在實驗室裡。這些是:
(a) 未知的化學成分; 即, 營養瓊脂、明膠, 等。
(6) 綜合; 即, 化學成分知道, 即, Giltay 解決方法為去掉的氮氣的有機體。
或和:
I. 液體媒體。這些有:
A. 媒體由動物組織和流體, 即, 營養湯, 清液湯, 碳水化合物湯, 牛奶, 血液, 硝酸鹽peptone 解決方法, Dunham 的解決方法被做。
B. 媒體由菜組織被做。在這些之中是: 麥芽膏(發芽的大麥), 啤酒麥芽酒, 酵母抽提物, 乾草注入, 自然果汁, 酒(被發酵的果汁) 。
C. 綜合媒體。
II 。堅實媒體。這些mav 被分類和:
A. 能液化, 即, 營養瓊脂, 營養明膠。
B. 非能液化, 有: 1. 媒體液體在, 一旦變硬, 無法通過實際平均值, 即, 媒體液化準備從蛋白性的流體並且組織譬如蛋、血液清液, 等的一種自然狀態但, 或綜合媒體變硬了與鈉硅酸鹽。
2 。是堅實在自然狀態, 即, 菜媒體譬如土豆、紅蘿蔔、香蕉, 等的媒體。
執行3 。媒體的滴定法
細菌學媒體的滴定法由肉被做是一個重要步驟在他們的準備, 因為微生物對營養基體的回應是敏感的。
程式。以下方法被使用為實驗室媒體, 除牛奶、麥芽酒、萍果汁、醋、果汁, 等之外。參見p. 22 。
1 。投入5 c.c 。媒體被測試和45 c.c 。蒸餾水在一個蒸發的盤。
2 。煮沸輕快一分鐘以常數攪動(擊退登記作為酸度) 的所有被溶化的二氧化碳。
$ 。添加1 個c.c. phenolphthalein 解決方法為指示符。
4 。滴定當熱, 更好地當煮沸, 與N/20 +氧化鈉, 或N/20 鹽酸作為案件de mands. ' 微弱但分明永久性玫瑰色顏色標記終點。這個顏色應該依然是永久性五分鐘。
5 。計算和記錄媒體的回應在程度更加充分的縮放比例, 是正常立方centi 米的數量* 酸或鹼當前在1000 立方體
* 解決方法被認為正常當它包含1 克等效alent 酸或基礎在1 公升。
酸或基礎的克等值是是等效的與或將中立化一價的酸1 克分子或星期一酸基礎的那個數量。
系統的好處是那1 c.c 。任一正常解決方法將中立化或確切地確切地將是等值對1 毫克equiva 被借任一個酸或基礎。(Noyes, Wm 。A., Chemistry 課本, 1913 年, p. 184 。)
媒體21 的滴定法
媒體的厘米, 使用phenolphthalein 當indi cator 。
6 。鹼性媒體由安置表示a 減() 符號在程度之前的數量強鹼性; 因而, 15 �&表明, 媒體是15 鹼性, 或15 c.c. 正常酸必須被添加每公升來中立ize 它。
酸媒體由安置表示a 加上(+) 符號在程度之前的數量酸度; 因而, +15 �&表明, 媒體是15 酸或15 c.c 。正常鹼必須被添加每公升來neu tralize 它。
實例。
玻璃量管讀取在滴定5.4 c.c 以後。
玻璃量管讀取在滴定2.0 c.c 之前。
c.c. N/20 NaOH 的編號被要求
中立化酸在5 c.c 。
媒體4 c.c 。
如果5 c.c 。媒體(是1/20 100 c.c 。) 要求
3 。4 c.c 。1/20 正常NaOH 中立化酸pres ent, 100 c.c 。媒體�&要求20X3.4 c.c 。或68 c.c 。1/20 正常NaOH 。
因為一個正常解決方法是20 倍1/20 正常解決方法的純度, 100 c.c 。媒體�&需要1/20 68 c.c 。或3.4 c.c 。正常NaOH 為中立化; 並且一公升或1000 c.c 。媒體�&要求10X3.4
c. c. 或34 c.c 。N/l NaOH 為中立化; 即, 媒體是34 酸。更加充分的縮放比例。這是媒體的公升。
當N/20 酸或鹼和媒體的一個5 c.c. 部份(在45 c.c 。蒸餾水) 被使用, 各1/10 1 c.c. 對應於1 個更加充分的縮放比例。
回應的調整。如果它欲留下媒體與a, 即, +15 回應, 我們有:
22 將軍微生物學
媒體的酸度
(+34) 3.4 c.c. 每100 c.c 。媒體
渴望的酸度(+15) 。．1.5 c.c. 每100 c.c 。媒體數量正常鹼
被添加1.9 c.c. 每100 c.c 。媒體
或10X1.9 c.c. = 19 c.c 。N/l NaOH 每1000 c.c 。媒體
因為正常解決方法是相等的純度由數量, 即, 1 c.c 。N/l 酸將中立化1 c.c 。N/l 鹼, 它欣然將被看見如果15 c.c 。N/l NaOH 必需中立化酸當前在1 公升媒體, 那麼那裡必須確切地是存在在那公升15 c.c 。N/l 酸, 或我們應該說回應是(+ 15) 十五度酸的。為其他程度酸度添加足夠的正常鹼使酸度降低到點渴望。
媒體的回應更改有些在其中立化以後, 特別是在絕�&期間, 而且在之後站立在普通溫度。這更改是往增加的酸度, 和是最明顯的在媒體富有在葡萄糖裡。它結果是必要確定媒體的滴定量在它被使用而不是引述圖被獲得在絕�&之前時候。
牛奶、萍果汁、醋、麥芽酒, 和果汁
程式。1 。入一個蒸發的盤評定5 c.c 。媒體被測試, 通過適當的吸移管。做50 c.c. 與蒸餾水。
不要加熱。上述媒體不應該是激昂在滴定法之前, 當他們包含揮發性酸或也許登記作為酸並且也許由煮沸擊退的其它有機物質,
2 。添加1 個c.c. phenolphthalein 解決方法。
3 。添加, 逐漸, 從一支準確玻璃量管, IN/20 NaOH 直到第一永久性粉紅色出現。
4 。注意數量NaOH 被要求為滴定法。
5 。總運行重複項。
牛奶23
6 。記錄作為程度酸度�&必需中立化一公升媒體N/l NaOH c.c. 的數量。
牛奶
牛奶有價值作為一個營養媒體為微生物因為: 它是一自然食物和幾乎理想的為很大數量的微生物。其構成、averag ing 3.40% 油脂, 3.50% 酪蛋白和卵蛋白, 4.50% 牛奶糖, 0.75% 灰, 87.75% 澆灌, 是證據, 它裝備食物以優秀形式為多數微生物。
許多細菌的生物化學的活動確定地顯露他們自已在擠奶的更改, 特別是石蕊牛奶, 接受。許多這些更改scopically 是看的宏指令。這些是:
(a) 酸生產。乳糖, C^IfeOn (牛奶糖), 首先被倒置, 形成二個己糖分子, 1 mol 。葡萄糖和1 mol 。半乳糖。
並且己糖產量各個分子乳酸二個分子:
己糖= 乳酸。
C 6 H 12 6 = 2CH 3 CH(OH)COOH 。
藍色石蕊被轉動紅色。
(b) 鹼生產。石蕊成為更加黑暗的藍色。這更改非常經常伴隨peptonization 。
(c) 減少(石蕊的脫色) 。這歸結於著色問題(石蕊的) 減少。許多微生物藏匿生產氫的酵素。氫與石蕊結合, 使它降低到其leuco 複合(無色) 。(Methylen 藍色成為顏色較不下像情況。) 這是減少和不是破壞可以由震動展示被脫色的文化以幾立方厘米與+ 結合的gen peroxid 。並且脫色石蕊的細菌
24 將軍微生物學
使氫peroxid 降低到E^O 和再氧化被減少的石蕊的出生氧氣(顯示由牛奶的reac tion 類型微生物當前) 。Re 氧化作用慢慢地發生在自然情況下。減少也許發生當牛奶是酸, 鹼性或中立。
(d) 凝結通過酸生產。酪蛋白, 像多數蛋白質, 是兩性的, 即, 它是能起反應兩個作為微弱的酸和一個微弱的基礎。否則不能溶解的酪蛋白被發現在牛奶在一個部分被溶化的狀態(膠質), 由於其組合與鈣鹽: 與酪蛋白以前被結合的鈣, 通過酸的生產由某些微有機體, 與乳酸現在結合; 結果酪蛋白沉澱物, 導致凝結(凝固) 。Lit mus 是斷然被轉動的紅色。牛奶飲用酸凝乳將滴定在+50 之上。
(e) Rennet 凝乳。凝固也許並且發生當媒體是中立或唯一slightly^ 酸。凝乳的這讚成duction 歸結於a rennet 像酵素由微生物生產, 和與rennet 的活動是相似用凝結牛奶在乳酪廠。
許多spore-forming 種類被查找在組rennet 生產的有機體之下。Rennet 凝乳被peptonization 通常跟隨。
(/) Peptonization 。凝乳由酸或人淨額形成的微生物生產也許逐漸消失, leav ing 唯一a 乳清像液體。這由生產蛋白水解的酵素消化凝乳和使它可溶解的某些細菌造成。堅實讚成teins 的這液化喜歡明膠、纖維蛋白、煮沸的蛋白、牛奶凝乳, 等, 歸結於二個組酵素、蛋白酵素和胰蛋白。
動物機體的蛋白酵素行動只在一個酸媒體(存在在胃) 。
動物機體的胰蛋白行動只在鹼性媒體(存在在肚腑) 。
石蕊牛奶25 的準備
pepsinand 胰蛋白像酵素由微有機體生產無法由他們的活動因而分離在某一回應媒體; 這變化隨微生物的種類和以環境條件。牛奶的活力tonization 更加少有地通常發生在中性, 輕微地鹼性, 或輕微地酸回應。
一些有機體peptonize 牛奶沒有形成rennet 凝乳。
(g) 氣體生產。這為描繪為氣泡的mation 在牛奶, 和是accom 常規panied 由酸凝乳的形成。凝乳非常公用收縮, 造成乳清擠壓。
執行4 。石蕊牛奶的準備
用具。新鮮分離或skimmed-milk; titra tion 用具; N/20 NaOH; phenolphthalein (指示符); 5 c.c. 吸移管; azolitmin, 2% 解決方法; 裝載的�&斗; 少量公雞; 不�&的試管; 用具為蒸汽sterili zation 。
方法。1 。新鮮分離或skimmed-milk 應該用。全脂牛奶是不受歡迎的由於其脂肪含量。
2 。滴定和記錄牛奶的回應。如果牛奶滴定在17 之上酸, 回應必須被調整到+15. 酸, 凝結或uncurdled 牛奶, 在neutrali zation 以後, 不做一個中意的營養媒體為微生物, 因此, 滴定量是在20-25 之上酸的牛奶應該被放棄。
新鮮的牛奶變化在酸度從12 到18 。牛奶以酸度在18 之上對phenolphthalein 和在18 它開始顯示酸著色不�&給一個令人滿意的藍色顏色與azolitmin, 。
3 。加2% Kahlbaum 的偶氮litmin 的一個標準解法。石蕊或azolitmin 僅僅被添加作為indi cator, 應該是充足的純度至於不稀釋牛奶在任一程度上。
26 將軍微生物學
4 。周到地混合牛奶和azolitmin 和管, 使用大約8 c.c 。石蕊擠奶在各支管裡。
注意。注意應該被採取防止牛奶與管的頂層聯繫, 因為它將導致棉花纖維遵守管。這也許由對"裝載的�&斗的用途避免。"
5, 消炎由加熱在流的蒸汽二十分鐘在�&個連續日。牛奶難消炎, 由於頻繁地是存在的抗性孢子。如果它欲消炎更大的批量項目貨簽比在管裡, 熱化的時期應該被加長。
小心: 過度加熱傾向於更改(caramelize) 牛奶糖。azolitmin 的顏色也許並且被毀壞。這些更改不是中意的。
執行5 。甘油土豆的準備
一定數量的產色素和致病性有機體在媒體上興旺特別很好包含甘油。甘油傾向這些器官isms 增長的方式以不為人所知, 但它例如似乎直接地被運用為油脂(Bact. Tubercu losis 的) 建築。
用具。大健康土豆; 圓柱形土豆刀子, 或黃柏鑽眼工人; 普通刀子; 翻轉者; 鈉汽車bonate, 1: 1000 年解決方法; 甘油, 5% 解決方法; 大不�&的試管, 或乳酪麵粉糊土豆管; 吸收劑棉花或短小玻璃標尺; 1 根c.c. 吸移管; 蒸餾水; 用具為蒸汽絕�&。
方法。1 。仔細地清洗一兩個大土豆。
2 。通過一位圓柱形土豆刀子或黃柏鑽眼工人, 土豆被剪切的磁道, 4 到6 cm 。長期和1.5 到1.8 cm 。直�&。與一把普通刀子, 對分各個磁道由對角剪切以便各個片斷類似在形狀瓊脂偏鋒。取消所有皮膚的部份在這些片斷。
3 。安置在翻轉者和浸泡在稀釋(1: 1000) 碳酸鈉的解決方法* 二十�&時數唯一。
* 碳酸鈉被使用中立化土豆的自然酸。
甘油土豆的準備
27
4 。不要調用片斷到甘油的5% 解決方法在水中另外二十�&時數僅僅。
5 。安置在不�&的管裡準備如下: 選擇額外大試管1.5 到2 cm 。直�&和乾淨和乾燥他們。安置吸收劑棉花或玻璃標尺0.5 cm 一個小片斷。X2.5 cm 。在每個底部。塞住與棉花和消炎在通常方式。(乳酪麵粉糊管需要被清洗和只被消炎。)
在介紹土豆片斷之前, 添加大約1 c.c 。蒸餾水對各支管, 使用pi pette 。土豆不應該接觸水。
6 。消炎由加熱在100 G. 在�&連續
幾天二十分鐘每個日。
圖8 。土豆管。(Orig. Northrup 。)
小心: 時間陳述在3 和4 必須嚴密地被遵守對, 土豆將必須被放棄由於contamina tion 以抗性spore-forming 有機體。
參考
SMIRNOW, M. R.: 值glycerinated 土豆作為培養基。分。F. Bakt., II Abt., Bd 。41, p. 303 。
28 將軍微生物學
執行6 。肉注入的準備
肉注入是普通營養媒體的基礎, 作為湯、明膠和瓊脂, 和並且很大數量的特殊營養媒體, 當糖湯, 等。
根據這些方向充足的肉注入前被削去做1 公升各個營養湯、明膠和瓊脂。
用具。1.5 公斤(3 Ibs 。) 精巧切好的新鮮的瘦牛肉; 1500 c.c. 自來水; 3.5 公升agateware 桶; 大�&斗; 圓環立場; 清洗布料; 1 公升量杯; 三個不�&的1 公升錐形燒瓶; 冰箱; 用具為蒸汽絕�&(autoclav 更好) 。
方法。1 。來1.5 公斤精巧切好的, 新鮮的瘦牛肉在一個3.5 公升agateware 桶, 添加1500 c.c 。自來水, * 不周到地混合和允許站立在一個冷靜安排(冰箱更喜歡) 十六到二十�&時數僅僅。
2 。設置一個大�&斗在圓環立場和安置乾淨的布料片斷在�&斗。安置一個量杯在�&斗之下。
3 。勞損肉注入通過乾淨的乾酪包布, 周到地壓出所有汁液。1.5 公升應該被收回。如果任一損失發生做1500 c.c., 使用自來水。
這收效的sanguineous 流體包含肉、可溶解鹽、extractives 和上色問題, 首要血紅蛋白的可溶解白蛋白。
4 。安置500 c.c 。肉注入在每個三個不�&的1 公升錐形燒瓶。替換插件, 和加熱在autoclav 在120 C. 三十分鐘。這是一個更加安全的程式比熱化一更久的時間在流的蒸汽。
在這熱化期間白蛋白能凝結由熱被沉澱。
_ 它有是查找必要和還更方便準備和消炎肉注入在之前進行與這準備這不同媒體在它是使用,
* 大約500 c.c 。水對各鎊肉。
營養湯29 的準備
由於是幾乎普遍地存在在切好的肉的抗性spore-forming 有機體; 時間經濟並且是對價。除非消炎immedi ately, 肉注入快速分解由於微生物群落的豐盈和分集被獲取在準備期間的各種各樣的進程為市場。
注入由新鮮地切好的瘦牛肉被做將變化在酸度在+15 之間和+25 更加充分的縮放比例。如果回應是明顯更低或更高, 微生物活動發生, 是, 或也許是, 有害對肉注入被使用媒體的食物值。
注入包含很少蛋白性的問題和首要包括肌肉、某些extractives, 和修改過的上色事態的可溶解鹽與蛋白質一起輕微的跟蹤由熱沒凝固。
執行7 。營養湯的準備
營養湯是標準液體被使用為cul tivating 的微生物。這是牛肉茶實際精讀taining 的peptone 。Peptone, 可溶解蛋白質不能凝結由熱, 被添加替換沉澱的被凝固的蛋白性的物質肉注入被消炎。鹽加代替磷酸鹽和碳酸鹽, 一些被沉澱在調整媒體酸度由+氧化鈉。
普通營養媒體的回應被調整到大約+15 與phenolphthalein 作為指示符, 照原樣被發現多數微生物增長最好在一媒體中立或輕微地鹼性對石蕊。
當它必需營養媒體是清楚的, 蛋卵蛋白被減少到光滑的粘貼用水(或蛋的井跳動白色) 被添加。由凝固, 蛋卵蛋白去除所有小顆粒機械上suspen 否則�&通過濾紙的sion 。
30 將軍微生物學
這個進程是最高效率的當蛋卵蛋白coagu lates 慢慢地。
因為蛋卵蛋白開始凝固在大約57 C. 它是absolutely 必要的為媒體冷卻到40-50 C. 在蛋卵蛋白的添加之前的好結果。
雖然蛋卵蛋白包含少量sol uble 問題不能凝結由熱, 作為糖, extractives 並且礦物問題, 將為服務作為微生物食物, 其目的在營養媒體是主要為其clari fying 的活動。
用具。500 c.c. 不�&的肉注入; 500 c.c. 自來水; 10 gms 。Peptone, Witte 的; 5 gms 。鹽; 10 gms 。蛋卵蛋白(或一個蛋); 3.5 公升瑪瑙商品桶; 滴定法用具; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenolphthalein (指示符); 蒸餾水; 5 c.c. 吸移管; 大攪拌棒; 粗糙的平衡; 大煤氣噴燃器; 大�&斗; 被打褶的濾紙; 裝載的�&斗; 不�&的試管; 不�&的1 公升燒瓶; 用具為蒸汽絕�&- 。
方法。1 。投入一個燒瓶的目錄肉注入(500 c.c 。) 在瑪瑙桶和添加500 c.c 。自來水。
2 。加1% Witte 的peptone 和0.5% 鹽。
3 。添加10 gms 。與100 c.c 很好被混合了的蛋卵蛋白。自來水。(投入蛋卵蛋白在翻轉者和加足夠的水形成粘貼。攪動直到光滑。然後加殘餘的水。一個蛋* 好被摔打也許被替代。) 周到地混合所有。
4 。熱在流的蒸汽�&十五分鐘或在autoclav 在120 C. 三十分鐘。
5 。滴定與N/20 NaOH 。
6 。調整媒體的回應到+15 與正常NaOH 或正常HC1 。Retitrate 和再調整如果需要。
7 。Counterpoise 和注意重量。
8 。煮沸十五分鐘在自由火焰, 攪動stantly 精讀。
* 它不是必要加水來蛋。
明膠31
9 。均衡和恢復任一損失由蒸發與蒸餾水。
10 。過濾當煮沸的熱的通過被打褶的濾紙早先洗滌了以1/2 公升開水。
11 。通過濾出液通過同樣紙它是明亮和確切。
12 。裝載三十不�&的試管, 使用大約8 c.c 。這個媒體為各支管。投入殘餘的湯在一個大, 不�&的燒瓶。
13 。加熱試管和目錄在流的蒸汽二十分鐘在三個連續日。
14 。消炎一個大燒瓶湯, 加熱二十分鐘�&個日在連續。
明膠
明膠是微生物學家的工具的當中一個。, 它符合二個目的: 作為微生物的一個唯一種類隔離使成為可能的一個堅實培養基, 一個技術設備, 和, 對藏匿蛋白水解的酵素的那些有機體, 它擔當一種含氮食物物料。
明膠具有分別是第一物質被使用為一個堅實培養基。1882 年這個媒體是origi nated 由羅伯特·Koch 和有從革命化了微生物學科學。在堅實媒體的簡介之前, 微生物的一個唯一種類的隔離幾乎總介入了困難和不確定性某一評定。引述從喬丹: "這無法是僅僅巧合, 巨大發現在細菌學方面快速地隨後了而來在這重要技術改善腳跟, 並且它是或許不是太多聲稱細菌學的上升從congeries 未完成雖然重要觀察入現代生物科學的位置應該建於關於這個期間(1882) 。"
Koch 的第一塊板材由傾吐的做了被液化
32 將軍微生物學
營養明膠在玻璃不�&, 平的片斷。學員在熟悉前削去令人滿意的板材困難以對"陪替式培養皿的" 用途將讚賞那些與在Koch 的第一塊明膠板材裡回面。
明膠是蛋白質, 即, 一種含氮食物物料。它包含當其重要要素碳、氫、氧氣, 和氮氣(其它要素, 然而, 譬如硫磺、磷, 等, 也許是存在) 。其經驗主義的配方根據Schiitzenberger 和Bourgeois 是C7eHi24N24.O29, 但這樣配方只提供首要組成部分的資訊和允許你形成分子的巨大規模的某一想法; 分子的結構的想法不被給。但是, 由消化與稀釋硫酸, 明膠劃分以與蛋白質, 產生glycin 、leucin 和其它肥膩amino-acids 相似的方式。
明膠是動物蛋白質, 但做熱發生作為明膠在動物組織。它存在那裡作為是纖維狀結締組織首席堅實組成部分的albu minoid 膠原, 並且被查找, 但在更小的百分比, 在軟骨、骨頭和韌帶。膠原從這些各種各樣的來源不是相同的在構成裡並且明膠相應地變化, 即, 明膠從軟骨與那其它來源不同因為它包含氮氣的更低的百分比。
明膠, 機體起因於膠原加水分解, 並且是硬朊。(Hofmeister 認為這加水分解進行根據等式:
膠原+ 水= 明膠
但與這樣的可變構成打交道物質,
這種類經驗主義的配方沒有偉大意義) 。
商業, 它準備從某些種類骨頭
並且皮膚的部份。這些被選擇, 被洗滌和被提取
明膠33
被水和與稀釋酸(氯化氫), 與rela tively 對熱的一點暴露, 以便只有可能股票的流動性崩解產品被形成和總值解決方法的結凍的力量不被毀壞。
術語明膠從拉丁動詞gelare 被派生, 凝結, 和叫介意這種物質首席屬性, 那其僵住的或結凍的屬性。
明膠屬於物質那有趣的組叫做膠體。這是選件類的典型的實例, 和陳列選件類的典型屬性。膠體, 在明顯對比對結晶狀, 欣然不結晶, 不散開和是不滲透性的互相。膠體最後微粒小比什麼我們普通�&命名實際細分, 僅相當主要比化工分子; 最小的顆粒的直�&在一個膠質解決方法, 即, 紅色膠質金子, 計數了通過超微範圍, 是6 millimicrons 或一微米的6 千分之一。一微米是第一千分之一一毫米。(細菌是更大的, 最小可視通過普通顯微鏡是從直�&0.3 到1.0 微米。) 他們的回應結果站立在實際和問題中間的化學變化, 和可以由考慮看見明膠屬性。
明膠將吸收溫暖的水(它的一個可觀的數量是幾乎不能溶解在冷水裡) 並且脹大, 產生, 在熱供應, 熔化對一個黏, 稠黏的解決方法再成膠狀在冷卻的果凍。水凝膠的名字嚮膠體被運用顯示這個屬性。普通明膠媒體為微生物學的工作包含12% 到15% 明膠。當烘乾在媒體tem peratures, 明膠可能再被再溶解和確定地redried 。從這個屬性這稱反演性膠體與的其它膠體區別它, 當他們的實際狀態一次被更改, 不能溶解, 即, 酪蛋白和硅的酸。
34 將軍微生物學
如果superdried 在大約130 C., 或過熱當在凝膠狀狀態或短時間在一個溫度在100 C. 之上, 或長期在100 C., 和在相互mittent 絕�&, 明膠是因此修改, 其再溶解的或resolidifying 的力量各自丟失。在superdrying, 再溶解的屬性的損失被放置對構成微粒的太接近的聯絡, 一個變化在實際狀態上; 在過熱的明膠, resolidifying 的力量的損失大概歸結於明膠分子的disintegra tion, 一種更加純淨地化工現象。gelatinizing 屬性的這損失由許多微生物的enzymic 活動造成和並且並且是崩解進程。
明膠擁有, 然而, 可觀地變化在不同的情況下的液化點。普通, 媒體包含12% 到15% 明膠將液化或熔化在一個溫度在附近24 到26 C., 再變硬ing 在8 到10 C. 對清楚, 透明果凍。結果, 明膠媒體也許被使用只為不要求一個更高的溫度比22 到24 C. 為發展的有機體。過度加熱在準備或絕�&過程中將導致一可觀降下液化點, 或許最後那麼低, 媒體將是液體在室溫(20 到21 C 。) 它欣然將被看見怎麼後者明膠媒體不能得心應手被使用為有機體的isola tion 。幾個資料將協助修理這在頭腦裡。
明膠變硬的屬性變化在倒數比例以加熱的時期在絕�&期間的進程; 其液化點降低在平均數2 C. 在□時數加熱在100 C 。這做得清楚為什麼這樣的必須被保重在明膠媒體的準備, 在這個媒體的分數絕�&在流出的蒸汽, 並且為什麼立即冷卻是必要的aftei; 各分餾在其準備過程中。
明膠35
雖然溫度在100 C. 之上比那是破壞性的對變硬的屬性100 C., 它是可能消炎媒體包含12% 到15% 明膠在autoclav (7 到8 Ibs. Pressure) 在112 到113 C. 二十分鐘或在15 Ibs. Pressure (120 C. 五分鐘) 沒有削弱其有用性作為一個堅實培養基。
對蒸汽的這個用途在壓力下(乾燥蒸汽) 是幾乎必要在明膠媒體情況下影響sterili zation, 因為明膠, 從其源泉、方法的準備, 和最新負債對汙穢, 幾乎肯定包含或負擔在其表面很大數量的非常抗性孢子。熱化在100 C. 三十分鐘在三個甚至�&個或五個連貫日總不是高效率的, 因為這些孢子總不發芽在二十�&時數之內在熱化和, 提到資料上面, 它以後欣然被看見, 降低lique 派別點不將被考慮像微不足道在斷斷續續的絕�&過程中。
明膠擁有使它重要為細菌學工作的其它屬性: 即, 在明膠板材文化結露水以後普通不收集在陪替式培養皿的蓋子(和與瓊脂) 滴下在明膠的表面和因而磨滅殖民地的表單和導致被隔絕的殖民地成為沾染與鄰居那些。存儲這個媒體或在試管裡或在板材裡, 不�&或接種, 因而使簡單比與瓊脂。
參考
范·DERHEIDE, C.C.: Gelatinose Losungen und Verflussigungspunkt der Nahrgelatine, 曲拱。F. Hyg., Bd 。30 日1897 年, 頁82-115 。
36 將軍微生物學
執行8 。營養明膠的準備
用具。500 c.c. 不�&的肉注入; 500 c.c. 自來水; 150 gms 。明膠; 10 gms 。Peptone, Witte 的; 5 gms 。鹽; 10 gms 。蛋卵蛋白(或一個蛋); 熱水鍋; 溫度計; 3.5 公升瑪瑙商品桶; 長式重的攪拌棒; 滴定法用具; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenolphthalein (指示符); 蒸餾水; 粗糙的bal ances; 大煤氣噴燃器; 大�&斗; 被打褶的濾紙; 裝載的�&斗; 不�&的試管; 不�&的500 c.c 。錐形燒瓶; 用具為蒸汽絕�&; 運行水浴或冰箱。
方法。1 。投入一個燒瓶的目錄肉注入(500 c.c 。) 在瑪瑙桶和添加500 c.c 。自來水。
2 。加15% 明膠、1% Witte 的peptone, 和0.5% 鹽來混合物。
3 。加熱這個混合物在熱水鍋溶化明膠、peptone 和鹽, 偶爾地攪動。
4 。冷卻到40-50 C 。這是必要的。
5 。然後添加10 gms 。與100 c.c 很好被混合了的蛋卵蛋白。自來水。(投入蛋卵蛋白在翻轉者, 加足夠的水形成粘貼和攪動直到光滑; 然後加殘餘的水。一個蛋很好被攪拌也許被替代。) 周到地混合所有。
6 。熱在流的蒸汽�&十五分鐘或在autoclav 在105 C. 三十分鐘。
7 。滴定與N/20 NaOH 。
8 。調整媒體的回應到+15 與正常NaOH 或正常HC1 。Re 再滴定和調整如果需要。
9 。Counterpoise 和注意重量。
10 。煮沸十五分鐘在自由火焰, 攪動stantly 精讀。
11 。均衡和恢復任一損失由蒸發與蒸餾水。
12 。過濾當煮沸熱的通過被打褶的濾紙
瓊脂37
早先洗滌與1/2 公升開水。通過濾出液通過同樣紙直到它是明亮和確切。
13 。裝載三十不�&的試管, 使用大約8 c.c 。媒體為各支管。劃分餘數成二個相等的部份和安置在不�&的1/2 公升錐形燒瓶裡。
14 。加熱在流的蒸汽二十分鐘在三個連續日。
15 。冷卻明膠在運行水浴, 在各熱化之後。必須被保重儘可能少加熱明膠, 因為一部分的明膠的變硬的力量丟失以各熱供應。
16 。消炎一個大燒瓶營養明膠, 熱二十分鐘在�&個日在連續。
瓊脂
瓊脂或瓊脂(從Malay 詞含義"vege 表"), 被使用在一种堅實培養基為細菌學工作做準備的物質, 是一條讚成輸送管準備從各種各樣的海草被查找在印度洋附近和在中國和日本水域中。這類型海草有幾個公用名字, 當錫蘭或Jaffna 青苔、孟加拉魚膠, 等。各種各樣的種類被使用為食物並且貿易是可觀的。
Payen, 法國化學家-(about 1859), 獲得了瓊脂果凍從海草, Gelidium corneum, 以fol lowing 的方式: 海草被允許站立有一段時間了在鹽酸的冷的稀溶液; 酸被漂洗取消了多次用水, 那麼海草被安置了在氨的冷的稀溶液; 其次氨被被重複的漂洗取消了與冷水。在這個進程期間, 海草丟失了53% 其重量在礦物鹽、上色問題, 和有機組成部分。剩餘部份煮沸了在水中,
38 將軍微生物學
在哪個進程期間菜果凍被提取了。解決方法因此獲得傾吐了, 留下無用的沉積後邊。這果凍是相同在存在在菜組織的構成方面像; 它像膠原在明膠的化工未被更改, 準備。商業瓊脂由蒸發大概準備這個解決方法to.dryness 通過不同的平均值。
瓊脂作為長期, 苗條, 灰色白色小條作為塊通常進入細菌學家的手, 或, 或更加特別近年來, 以歐洲製造的形式一灰色白色戰俘der 。
瓊脂, 與明膠對比, 是碳水化合物, 即, 它包括碳、氫和氧氣的組合唯一。氮氣跟蹤是存在作為雜質。其基本的constit uents 的上述定性確定由Hueppe 做了由Payen, 由Parumbaru 和, 做他們的確定在瓊脂由不同的來源。只要能被查明, 其經驗主義的配方未被調查在任何程度上。
像明膠, 然而, 瓊脂是反演性膠體。它浸泡在冷水裡, 溶化在熱水在一長式煮沸以後對一個無味和無氣味的清楚的解決方法, 和堅實ifies 在冷卻對更或較少不透明的果凍。其含水解決方法是中立或幾乎中立的對酚phthalein; 但是, 下落或二第二十種正常鈉含水物是充足使桃紅色顏色可認識。
瓊脂膠質屬性被普通微生物的活動像那些明膠不毀壞被長式繼續的熱化在高溫, 亦不。上述屬性, 然而, 被影響和也許被瓊脂被溶化液體的回應完全削弱。
液體的回應, 即, 是否它酸或鹼性, 影響瓊脂至於其可溶性、扎實、顏色、透明度、濾運領和相當數量condensa tion 水。如果瓊脂被溶化在酸度的液體
瓊脂39
等值對0.1% HC1, 瓊脂非常欣然溶化, 快速過濾得, 總值濾出液是不變硬在冷卻的一個light-yellow, 透明, 溜滑, 含水解決方法。如果與+ 結合的氯的酸的更小的百分比被使用, 固體化發生(在40 C 以下。) 但果凍"不�&站起來" 和是因此無用為瓊脂偏鋒或板材文化。很多精讀densation 水並且是存在。
如果瓊脂被溶化在微弱的鹼性或中立湯, 慢慢地過濾和快速變硬在40 C., 對一非常堅實, 不透明的厚實, 紅棕色, 黏性液體被獲得, 烘乾果凍, 有但少許結露水; 它保留其形狀很好在偏鋒和在板材裡。因而瓊脂的值作為一個堅實培養基被上升或降低根據強鹼性或酸度cjegree 。
它必須是著名另外, 然而, 當瓊脂變硬的屬性被酸超額的出現一次毀壞在其解決方法, 這個屬性可能由中立化從未收復與鹼; 酸每manently 毀壞膠體的反演性。
瓊脂melting-point (1.5% 在中立解決方法) 是97 C. 和雖然其變硬的點是在40 C., 何時一旦它變硬了它將站起來在溫箱在溫度50 C 。為細菌學目的, 唯一保留流動性在從38 到40 C. Agar 保留流動性只在一個溫度在這點之上�&是太熱的當在一個可變的狀態至於使用的那份瓊脂的表單可能被使用; 有機體的生命力被介紹被高溫�&削弱或毀壞了。
困難遇到在一個堅實培養基的準備從瓊脂, 由於其緩慢的可溶性、力cosity 和結果緩慢的濾運領。其解決方法(消化) 被影響, 依照被提及上面, 由長式熱化在熱水鍋、蒸汽消毒器、autoclav, 或自由火焰。時間必需為完全消化取決於三件事: 回應
40 將軍微生物學
瓊脂被溶化的液體, 瓊脂百分比目錄, 和方法溶化。瓊脂解決方法的回應的影響被對待了以上。至於常規文化使用, 然而, 普通瓊脂被做+15 更加充分的縮放比例(瓊脂變硬有困難在+30 之上更加充分的縮放比例) 。
百分之一瓊脂更加容易地是可溶物在同等情況下比一更高的百分比。一和一半百分比是金額被使用在普通瓊脂媒體, 給有些更加僵硬和因而更加中意的果凍。
瓊脂最迅速地被消化在自由火焰。如果充足地沒加熱, 在瓊脂的濾清和絕�&以後由斷斷續續的方法, 一叢毛狀precip itate 頻繁地出現在早先清楚媒體。這可能由服從做消失在許多情況下對autoclav (120 C 的溫度。15 Ibs.) 。
瓊脂為培養基應該是整個地清楚當液體, 和同類地不透明透亮當固體; 它應該有translucence 充足允許深刻的殖民地在板材或刺中文化欣然被觀察; 它不應該包含叢毛狀物料, 沉積, 或棉花或濾紙張, 作為這些微生物的更加後面的典型的殖民地發展和, 對無經驗, 也許某個時候弄錯為殖民地。
在第一方法曾經被使用為做瓊脂處理沉積被結算對底層的培養基, 而不是過濾熱的瓊脂通過濾紙、吸收劑棉花, 或石棉, 它讓冷卻, dur ing; 當固體沉積被切除了。這個方法不是中意的, 因為總值瓊脂的清楚�&取決於冷卻的費率; 更慢冷卻, 沉積作用更加完全地�&發生。
瓊脂不是食物為微生物總之, 即, 它由多數細菌消化酵素像明膠不影響, 。但是, 有液化瓊脂的力量, 在之中是B 的幾細菌知道。
營養瓊脂41 的準備
gelaticus n. sp. (gran) 並且Bad. Nenckii, 其中之二找到, 和�&被預計, 在海水裡。瓊脂的這種compara tive 惰性使它重要為準備, 堅實綜合媒體, 值的也許是en hanced 由服從商業瓊脂對自然發酵在哪個進程期間用能食物物質所有跟蹤由微生物用完當前。(Beijerinck 。)
瓊脂有用特殊在微生物耕種必須被�&辦在一個溫度在明膠之上melting-point 的細菌學工作。這個功能使被採取了在醫療細菌學方面的了不起的大步成為可能, 許多致病性細菌可能被隔絕和增長只有困難在tempera tures 在那機體之下。
參考
史密斯, ERWIN F.: 細菌關於植物病。卷。I,
頁31-36 。幾個例證。SCHULTZ, N. K.: Zur Frage 馮der Bereitung einiger Nahrsubstrate 。
分。F. Bakt 。I. Orig., Bd 。10 日1891 年, p. 57 。
執行9 。營養瓊脂的準備
用具。3.5 公升瑪瑙商品桶; 15 gms 。瓊脂; 10 gms 。Peptone; 5 gms 。鹽; 10 gms 。蛋卵蛋白(或一個蛋); 500 c.c. 不�&的肉注入; 500 c.c. 自來水; 滴定法用具; N/20 NaOH; N/l NaOH; 酚phthalein (指示符); 蒸餾水; 大�&斗; 被打褶的濾紙; 裝載的�&斗; 不�&的試管; 不�&的公升燒瓶; 粗糙的平衡; 大煤氣噴燃器; 1 公升量杯; 用具為蒸汽絕�&。
方法。1 。在一個3 公升瑪瑙商品桶安排15 gms 。瓊脂在500 c.c 。自來水。
2 。洗滌瓊脂很好, 分離細片和squeez ing 它通過手。
3 。傾析骯髒的水, 評定金額傾吐
42
常規微生物學
; 用同樣相當數量乾淨的自來水替換。
重複。
4 。溶化在自由火焰和煮沸五分鐘, 經常攪動。solu tion 必須是整個地從瓊脂解脫團。
5 。加1% Witte 的peptone 和0.5% 鹽來煮沸的瓊脂。
6 。對500 c.c 。肉在融合添加10 gms 。與100 c.c 很好被混合了的蛋al bumen 。自來水。(投入蛋卵蛋白在翻轉者和加足夠的水形成粘貼。攪動直到光滑和然後加保留ing 水。一個蛋; 井被摔打,
圖9 。熱水�&斗為也許被替代。) 混合所有過濾的瓊脂或明膠。周到地
7 。慢慢地傾吐熔化瓊脂混合物入肉注入, 經常攪動。熱在autoclav 在120 C. �&十五分鐘或一時數在流的蒸汽。
附註。時期為這熱化也許被加長對好處, 但從未被變短。如果瓊脂充足地未被加熱在濾清之前, 叢毛狀沉澱物將形成在管在加熱在流的蒸汽。這也許由短時間加熱在許多情況下造成消失在autoclav 在15 Ibs 。
8 。滴定與N/20 NaOH 。
9 。調整媒體的回應到+15 與正常NaOH 或正常HC1 。Retitrate 和重調回應如果需要。
10 。Counterpoise 和注意重量。
11 。煮沸十五分鐘在自由火焰, 攪動stantly 精讀,
DUNHAM 的PEPTONE 解決方法43
12 。均衡和組成任一損失在重量與煮沸的蒸餾水。
13 。過濾煮沸的熱的通過被打褶的濾紙早先被洗滌與開水。通過濾出液通過同樣紙直到清楚。
14 。裝載60 到70 不�&的試管, 使用大約8 c.c 。媒體為各支管。
15 。加熱在流的蒸汽二十分鐘在三個suc cessive 日。
16 。在最終熱化的末端, 安置瓊脂管在一個傾斜的位置變硬(不要允許媒體接觸插件) 以便大表面是前sented 為微生物的耕種。這些叫做瓊脂偏鋒。
附註。如果瓊脂管將被使用只為瓊脂偏鋒, 無足輕重媒體必要在管比當他們將被使用為鍍層。
17 。消炎一個大燒瓶瓊脂, 熱三十分鐘在�&個連續日。
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