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我認為科學享受非常成功因為它有聚焦其工作成績的這樣一個有限和狹窄的領土。即, 實際宇宙。~Ken Jenkins
一臺質譜儀根據事實不同的化學製品有不同的質量, 並且這是什麼確定什麼化學製品是存在在範例。有不同地不僅分析離子的許多類型質譜儀但導致不同的類型離子; 但是他們全都使用電和磁場更換離子路�&在某個方面。
在80 年代末和90 年代初期期間, 範例電離二個新建方法導致質量光譜接受一次革命在生物聚合物分析, 即ESI 38 並且MALDI.39 在一個十年前, 第一次, 能評定蛋白質的femtomole 數量分子質量超出100 kDa 的質量光計測定的技術, 經常改善比0.01% 準確性, 廣泛變得可利用對蛋白質化學家。這些方法是兩成功以形成離子從大, 易變的原生質沒有analyte 的重大退化。不僅是他們兩個敏感技術而且迅速 – 女士和MS/MS 順序光譜可能被獲取在幾秒鐘內。ESI 和MALDI, 由於他們的許多差額, 補全並且許多生物聚合物實驗室得以進入對兩個技術的。
範例分離、隔離和準備為質量光計測定的技術常規, 介入2-DE (2-Dimenisional 電泳法), 可能分離多達5000 不同蛋白質在一個唯一實驗的技術。總之, 2-DE 以及是能分離蛋白質在一個等電位點(pI) 範圍–的3.5 10 和的分子質量之內範圍從6 到300 kDa, 能區別在過帳平移被修改的蛋白質(即磷酸化) 並且他們的非被修改的伴侶之間。一旦分離, 蛋白質成分靠弄髒的技術(即銀色汙點、螢光汙點, Coomassie 藍色) 顯露並且一次位於他們可能從膠凝體然後被提取。蛋白質無法容易地被洗脫從膠凝體沒有對洗滌劑的用途, 是損傷的對質量光計測定的分析; 額外, 大蛋白質不傾向於是異種的(即由於glycosylation) 並且因此擁有可能與對應的項有關在資料庫的分子質量。克服這些阻礙, elution 步驟傾向於被完成在蛋白質由一個被切除的膠凝體片斷的一次含水acetonitrile 洗滌消化了之後。這增加產量提取5 和由使用在膠凝體消化方法使用胰蛋白, 依照被發布被描述了和廣泛被應用或以較小修改, 生產蛋白質確定可能被做的一個女士兼容範例由。消化步驟可能由一個選項減少和烷化步驟在之前劈開和阻攔存在在半胱氨酸殘滓之間的二硫化物橋梁。機器人系統被開發自動化蛋白質地點切除從2 膠凝體, 執行隨後enzymatic 消化並且調用範例MALDI-MS 瞄準板材為首字母女士分析。為許多申請, peptides 從在膠凝體消化被收回要求濃度和洗淨在被質量光譜之前被分析特別是如果ESI 是電離使用的方法。反回階段高性能液體
色譜法(HPLC) 是一個方法達到這; 其它方法介入對ZipTips (Millipore) (吸移管要訣被包裝以C18 物料) 或Poros R2 灌注的用途物料(Perseptive 生物系統) 。儘管其普遍接受, 2-DE 的限制包括非常小或非常大蛋白質, 非常酸性或非常基本的蛋白質排除, 並且疏水蛋白質譬如膜蛋白質。它被認為那
只20% 膠凝體被裝載的蛋白質可能形象化和被分析。其它約束是, 可能被裝載的相當數量範例是有限的造成不遵守
低濃度蛋白質和那最常用的弄髒的技術並且有非線性回應系數。實踐上, 2-DE 是一個勞動強度進程介入提供機�&給雜質譬如角質素沾染範例的手工處理步驟。一個第2 個膠凝體將需要一個日完成和大約一月份為一個完全結構分析由女士, 雖然自動化可能幫助汙染問題和加速分析在某種程度上。
替代, 蛋白質準備女士兼容方法是在發展中但技術未湧現作為普遍替換。這些方法常規打算得連接蛋白質範例直接地對MS/MS 分析因此消滅費時的範例準備步驟和需要對於一個初步女士分析。血絲等電位聚焦(CIEF)-MS 和預備等電位聚焦被範圍排除色譜法女士跟隨是是被比較的詳細與2-DE 根據分離effciency 、高峰能力、精確度和強壯的方法, 以前出現更加有利的alternative.The 指揮對複雜peptide 混合物的分析從蛋白質混合物使用聯機, 反回階段高性能液相色譜(HPLC)-MS/MS 成功被使用了得當替代對2DE 和這帶領了多維色譜法如果更加巨大的peptide 分離是中意的在MS/MS 分析之前。二維色譜法實例包括陰離子或正離子替換被反回階段HPLC 和範圍排除色譜法跟隨被反回階段HPLC 跟隨。另, 可選擇方法是使用聯合的固體階段微提取與血絲electrophoresis(CE) 一起被耦合對ESI MS/MS 為對一本總蛋白含量tryptic 文摘的分析。這個方法買得起peptide 片段的高分辨率分離允許確定80–90% 蛋白質在這特殊酵母核糖體複雜。耦合microfluidic 設備對女士是結合範例處理和分離的一個進一步方法, 並且整潔地協調與analysis.A nano ESI 女士另外途�&為有選擇性的蛋白質分餾並且確定使用使用一個表面獲取方法使用抗體或化工被修改的表面獲取蛋白質特定組由MALDI-MS 然後分析的ProteinChip 技術(Ciphergen) 。這個技術, 以表面著名提高了Laser 解吸附作用電離(SELDI)-MS35, 有在不同的範例蛋白質含量的比較的巨大潛力。
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