06-18-2008, 下午04:56
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 PCR 禁止由DNA? 我使用質粒DNA (從Qiagen midi 工具箱) 生成標準曲線至於使用與qRT-PCR. 我的曲線包括標準五點序列稀釋範圍從100 ng 對0.01 ng DNA 在25.uL 回應數量; 所有五濃度被稀釋了從同樣來源。 我的問題: 當更多稀釋點(1 ng 、0.1 ng, 和0.01 ng) 成功放大, 我一致地不看放大作用在最高的二點(100 ng, 10 ng 中) 。 我不相信, 試劑限制因為回應比那些被優選了使用(genomic) DNA 以更高的濃度在我的曲線。所以我能只假設, 某事禁止放大作用在100 ng 和10 ng 範例, 並且二個數量級的稀釋是充足克服它。如果任何人有其它建議, 請感到自由評論。 Qiagen 代表建議我的DNA 也許禁止PCR 。當我不被說服100 ng DNA 在一種25 uL 回應是足夠造成問題獨自, 它是可能的, 我的質粒DNA 機械上禁止PCR (即supercoiled)? 如果那樣, 我怎麼應該演講這? 任一張輸入被讚賞。感謝事先!        |
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今天
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06-23-2008, 下午05:08
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| Re: PCR 禁止由DNA? 感謝回應。我洗脫了在TE; 但是, 我然後稀釋了它大約10:1 在H20 。 並且, 我的PCR 運作, 不是以最高的濃度。我運行5 點曲線在一式三份, 並且所有井(用同樣底漆、緩衝、polymerase, 等被裝載) 是成功 除了 以10 ng 和100 ng 濃度。 |
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