08-14-2006, 上午02:19
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 EMSA 幫助... 請緊急 大家好, 一個新來者對這個論壇。現在上午在混亂....EMSA 混亂  所有去年我做□EMSA 和得到好班次。我使用IVT/T 蛋白質在麥子毒菌解壓縮裡。我使用空麥子毒菌解壓縮作為一個負控制。其它control/s 我需要什麼??? supershift 不運作根本....tried 許多情況。 誰由overexpressing 做了EMSA tag(flag) 蛋白質在say..HEK293 電池裡並且由做核解壓縮transfected 做超級班次與反標誌的電池? 回復 K         |
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今天
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 被贊助的連結 |
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08-14-2006, 上午02:36
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 Re: EMSA 幫助... 請緊急 地獄再, 我實際上忘記提及一件事.... 我過去常使用空麥子毒菌解壓縮當一個負控制.....now (寧可太延遲) 它觸擊了我我應該有某一事IVT/Ted 在麥子毒菌以父母親傳染媒介作為我的蛋白質... 如果我的proteiin 是在pCDNA3-XYZ... 我應該有負麥子毒菌IVT/Ted 基本的空pCDNA3 傳染媒介, 權利?? sadddddest 輕拍是, 傳染媒介單獨並且顯示班次哪些同我的蛋白質一樣班次。空傳染媒介�&做什麼並且那困境對DNA 探查嗎? 嗎?
嗎? 嗎? 其基本上空... 多個coning 站點是那裡在SP6 促進者區域以後。 這件事驅動我堅果!!! 如此這個平均值, 所有班次i thot 實際上那些日子是某一事未指明???? thats 不公平地!!!  |
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08-14-2006, 下午01:03
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 Re: EMSA 幫助... 請緊急 報價:
湧出Admin... 我祝願是真實的... 但混合沒有發生。 我使用我嘗試與anti-FLAG..and 的1ug 並且沒有DTT..still 沒有班次... 我認為蛋白質沒有束縛對探針首先... 的n ow..maybe becoz 因為班次實際上是從傳染媒介 是, 我做了S 並且NS 寒冷競爭... 但u 看見因為傳染媒介束縛它和未競爭各自地與上述冷的競爭對手競爭的探針... 。 I 寂靜的wonder..what 能是IVT/Ted 從束縛那麼很好對我們的探針的空傳染媒介。 有我能證明是的其他方式, 班次是從我的蛋白質和不是傳染媒介?? 我們的是大蛋白質~100kDa... 做u 認為它將是值得嘗試在59:1 bis acryl 比率... 基本上嘗試的更大的毛孔範圍?? 我看見一些探針黏附在井... 做u 認為蛋白質Dna 複雜不能從井出來因為毛孔範圍小(29:1..i 用途)?? 我看見canalban 的emsa..pain pics... 他們是因此美麗的... 願望礦也是是 感謝回復admin K |
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09-14-2006, 上午09:50
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 Re: EMSA 幫助... 請緊急 報價:
感謝提及! 我讀您的過帳一點點當前和考慮。我並且是相對地新建對EMSAs 世界但我做了公正的位元開掘在周圍為資訊, 加上有幫助負荷從這個論壇- 您是在正確的安排  您能嘗試的幾件想法和事: 1)Could 是, 您的lysate 濃度是太高? 您做了稀釋系列橫跨範圍嗎? 我發現作為測距器, lysate 的1:10 的10 個範例稀釋系列從整潔值得嘗試。 2)You 不提及是否您運載這在室臨時或在coldroom 。如果您做□這在 room temp, then try mixing the DNA and protein in the coldroom and also running the gel at that temperature. 3)The fact that you have some complex being retained in the wells is a bit strange. Could you be precipitating your protein when complex formation occurs? Have a look at your binding buffer components and make sure that the pH and ionic components are ok? I don't know the make up of your binding buffer but I've included mine here for reference. (25mM HEPES-KOH [pH7.9], 0.1mM EDTA, 5mM MgCl2, 50mM KCl, 1mM DTT, 20% (w/v) glycerol, 0.2mM PMSF, and 1ul protease inhibitor cocktail containing 1.6ug poly (dI-dC) . (dI-dC) (Sigma) Hope this helps... Keep posting...we'll get you through this...  Canalba, UK |
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Re: EMSA 幫助... 請緊急 
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