PCR 禁止由DNA

Dionisia · #1 (**permalink**) 06-23-2008, 上午12:14

大家好!

我有一個大pcr 問題。我設法�&辦一pcr 使用我淨化使用Qiagen midi 工具箱的質粒DNA 。

我使用這DNA 做標準曲線為qRT-PCR 。

我的標準曲線為qRT-PCR 包括範圍從10ng 到DNA 0.01ng 在25.uL 回應數量的五點序列稀釋。

我的問題是, 我不看放大作用以最高的二點在曲線是10ng 和1ng 地點。

我不認為我的試劑限制因為我優選了PCR 回應以更高的濃度比那□在我的曲線。某事禁止我的PCR 放大作用在更高的DNA 含量並且甚而Qiagen 代表建議我的DNA 也許禁止PCR 。
誰有任何想法嗎?
感謝everyones 事先幫助
歡呼

postdock · #2 (**permalink**) 06-23-2008, 上午12:24

嘿那裡,

您使用了什麼elution 緩衝, Qiagen EB 緩衝?

有鹽和EDTA 在也許導致PCR 麻煩的Qiagen EB 。

還不要忘記, 那裡能是殘餘的對氨基苯甲酸二從也許禁止PCR 回應的效率的您的miniprep 。

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