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04-25-2008, 上午09:09
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 Re: Arabidopsis DNA 提取從葉子 我有我使用unfortunatly 是相當快速... 其在uni 的一個好協議在星期一因此我將必須張貼它為您。
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04-25-2008, 下午05:51
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| Re: Arabidopsis DNA 提取從葉子 這我從前使用的程式: 1. 稱0.1-0.2 克組織(~4 充分三片葉的葉子) 在1.5ml microfuge 管裡。快速凍結和研磨搽粉與藍色杵- 不要讓解凍 2.Add 0.75ml EB 緩衝 EB 緩衝: 100mM Tris pH8.0 50mM EDTA pH8.0 500mM NaCl 10mM beta Merc (添加beta merc 新everytime) 3. 持續混合直到被混合的好和解凍。 4. 添加0.05ml 20% SDS, 震動很好和孵化管在65C 10min 5. 添加0.25ml 5M 鉀醋酸鹽, 震動很好和孵化管在冰(0C) 20min 。(保留在冰直到所有範例被溶解) 。 6.Spin 管在21,000g 為20min 7.remove 浮在表層的w/pipetman (~1ml) 並且被接通的mira 布料入新建1.5ml 管。 8. 添加500ul 異丙醇, 倒置混合好和孵化在-20C 為30min-1hr 。 9. 藥丸DNA 在21,000g 為15min -- 傾吐浮在表層和乾燥藥丸由倒置管在毛巾紙為5min 。 10. 再溶解藥丸與0.7ml TE (50mM Tris, 10mM EDTA pH8) 由鼓動; 確定的藥丸被重新懸掛。 11. 轉動管以最大速度使10min 取消不能溶解的殘骸。 12. 調用上層清液到新建管和添加75.ul 3M 鈉醋酸鹽和500ul 異丙醇。 13. 混合很好由倒置和轉動射擊DNA 為30sec 。 14. 洗滌藥丸與700ul 80% EtOH -- 轉動和去除EtOH, 乾燥~5min 被倒置在毛巾紙。 15. 再溶解在100ul 10mM Tris, 0.5mM EDTA 酸鹼度8.0 。 16. 讓坐在4C 。 17. 檢查OD260 和稀釋為PCR (~1/100 或5ng/ul) 。 解決方法。 750ul/sample -- EB 緩衝: 100mM Tris 酸鹼度8.0, 50mM EDTA 酸鹼度8.0, 500mM NaCl, 10mM beta □基乙醇 50ul/sample -- 20%SDS 250ul/sample---5M 鉀醋酸鹽 700ul/sample---50mM Tris, 10mM EDTA 酸鹼度8.0 1mL/sample -- 異丙醇 75.ul/sample -- 3M NaAcetate 700ul/sample -- 80% EtOH 100ul/sample -- 10mM Tris, 0.5mM EDTA 酸鹼度8.0 材料和孵養器。 藍色塑料杵。 -20C 冷凍機 65C 熱水鍋 4C 冰箱 冰0C 分光光度表 Mira 布料 |
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04-26-2008, 上午12:05
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| Re: Arabidopsis DNA 提取從葉子 edwards prep 似乎對我更加簡單... 它使用2 支1.7ml 管但doesnt 要求所有新解決方法。 在星期一再將張貼它為您。
__________________ 實際上幫助的一種自由LIMS 和ELN 資源。 現在組織您的實驗室資料!!! 其free-and-easy 使用。 http://www.YourLabData.com Bioinformatic 工具: 順序操作 - 熔化的溫度(Tm) 計算器 - 在Silico PCR 放大作用 |
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04-30-2008, 上午01:50
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| Re: Arabidopsis DNA 提取從葉子 喂! 為那些您要求我張貼了協議這裡: Edwards Preps (A 簡單和迅速方法為工廠genomic DNA 的準備為PCR 分析) pdf 版本的它是可利用的這裡: Edwards 準備好PDF 希望它幫助某人!
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