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科學是無知地勢。~Oliver Wendell Holmes, Sr., 醫療雜文1883 年
版權2007 分子崗位
南部弄髒是技術命名以其發明者和開發員, 1975 年英國的生物學家Edwin M. Southern 。南部弄髒是允許一個特定DNA 順序的檢測的技術(基因或其他) 在DNA (即蜂窩電話DNA) 一個大, 複雜範例。
"在PCR 之前和粗劣齋戒程式化更改了是遺傳學的我們的觀點對於宇宙, 南部的汙點是一匹普遍耕馬。沒有一個實驗在在某一階段沒有使用一個南部的汙點的分子遺傳學。這是仍然一個有用的工具並且您需要知道關於它以便您能解釋歷史資料。"
南部的汙點的繪製technique.Figure 是版權。如果您�&想使用它為演講或科學項目, 請與我們聯繫為權限。
在 步驟1, DNA 被消化與限制endonucleases 。高分子量的DNA 被消化入更小的片段。
在 步驟2, DNA 由範圍然後分離由電泳法在agarose 膠凝體。
在 步驟3, 尼龍或硝化纖維素膜板料(紫色) 被安置在agarose 膠凝體頂部在緩衝溶液。這被考慮弄髒的或調用的階段。壓力嚮膠凝體施加使用或吸或由安置棧毛巾紙和重量在膜頂部和膠凝體保證甚而聯絡在膠凝體和膜之間。緩衝調用由血絲活動從水位高潛在的區域到最低水位潛在的區域(通常濾紙和紙組織) 然後使用從膠凝體移動DNA 向膜。允許DNA 束縛以高親合力對膜通過離子交往在negatively-charged DNA 和positively-charged 膜之間的Positively-charged 膜(紫色) 通常被使用。
在 步驟4, 硝化纖維素膜由對高溫度的暴露烘烤(從60 到100 .C) 。尼龍膜暴露於紫外輻射。這些步驟使用保證DNA 的永久性和共價交鍵當前在範圍對膜。
在 步驟5, 膜暴露於一根radiolabeled 探針。這根探針是有您的順序利益您想要檢測的一個唯一擱淺的DNA 片段。這根探針被孵化與膜和被允許雜交與DNA 在膜。探針通常radiolabeled 以便他們能被檢測在影片, 然而是非放射性的譬如螢光或產色素染料的更加新建的探針並且被使用。在雜交以後, 超額未捆綁的探針沖走從膜, 離開特定一定探針。
在 步驟6, 雜交的模式由形象化檢測在X光片由自動射線照像術在一根放射性或螢光探針情況下, 或由顏色的發展在膜如果一個產色素探知方法被運用。
(附註為步驟3: 如果大DNA 片段是存在大於15 kb 在範圍也許是depurinated 那時稀釋HCl 酸在弄髒前將中斷DNA 更小的片斷, 如此允許從膠凝體的更加高效率的調用到膜。如果鹼性調用方法被使用, DNA 膠凝體被安置入一個鹼性解決方法(典型地包含+氧化鈉) 弈質double-stranded DNA 。變性在一個鹼性環境裡提供negatively-charged DNA 的改善的捆綁對一個positively-charged 膜, 分離它入唯一DNA 子線為最新雜交對探針(參見下面), 和毀壞也許仍然是存在在DNA 的任一殘餘的核糖核酸。
音像: 傾聽一個詳細的南部的汙點解釋! 禮貌: 全國人的染色體研究所。
依照被提及, 南部的汙點是一個技術使用辨認和找出是補全對DNA 其它片斷稱探針的DNA 順序。
分離在genomic 或補全DNA 的順序或片段一個電泳膠凝體, 由endonucleases 部分消化, 片段' 被弄髒' 膜和然後被允許雜交以特定, 被標記探針為了檢測哪個範圍包含片段或基因利益。南部的汙點是特別有用的在檢測大基因rearrangements/deletions 和大trinucleotide 重複擴展。
一個南部的汙點是方法定期地使用在分子生物學檢查一個DNA 順序的出現在DNA 範例。南部弄髒與方法結合agarose 膠凝體電泳法為DNA 的範圍分離調用範圍被分離的DNA 到補白膜為探針雜交。其它弄髒的方法(即, 西部汙點、北汙點, 西南汙點) 使用相似的原則, 僅使用核糖核酸或蛋白質, 以後被命名了得關於南部的名字。因為技術由此得名被命名了, 南部的汙點應該大寫, 但是北和西部汙點不應該。
它並且使用確定限制片段的分子量和評定相對金額用不同的範例。
汙點是調用DNA 和核糖核酸蛋白質的技術承運人因此他們可能被分離, 和經常跟隨對膠凝體電泳法的用途。南部的汙點被使用為調用DNA 。
探針的雜交對一個特定DNA 片段在補白膜表明, 這個片段包含是補全對探針的DNA 順序。
南部的汙點被使用在幾個主要區域包括基因發現和映射, 演變和發展研究、診斷和辯論術。
在優選的情況下, 南部弄髒檢測DNA 的~ 0.1 頁利益
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