組蛋白Acetylation

得知組蛋白acetylation 。

組蛋白Acetylation

1964 年Vincent Allfrey 發現, 組蛋白可能被查找在乙縮醛化並且unacetylated 表單。乙縮醛化的表單有acetyl 組被添加來氨基組在賴氨酸旁邊鏈子。Allfrey 並且發現, acetylation 關聯以基因活動。Unacetylated 組蛋白, 被添加來DNA, 傾向於抑制副本, 當乙縮醛化的組蛋白是副本更加微弱的鎮壓者。這些結果暗示因此, 有酵素在乙縮醛化和deacetylate 組蛋白的中堅力量, 並且影響因此基因活動。

詹姆斯·Brownell 和大衛Allis 在1996 成功辨認和淨化組蛋白acetyltransferase (帽子) 。帽子是從原服務供應商的酵素(acetyl CoA) 調用acetyl 組到核心組蛋白。為了隔絕這酵素Brownell 和Allis 開始了以Tetrahymena (ciliated protozoan) 電池因為這個有機體有沉重乙縮醛化, 暗示的組蛋白這些電池包含相對地帽子的高濃度。他們準備了解壓縮從macronuclei (包含有效的基因) 的大Tetrahymena 中堅力量並且服從了他們對膠凝體電泳法在SDS 膠凝體懷孕與組蛋白。帽子活動由浸泡檢測了膠凝體在acetyl的解決方法CoA 由一個放射性標籤在acetyl 組。如果膠凝體包含了一個範圍以帽子活動, 帽子從acetyl CoA �&調用被標記的acetyl 組到組蛋白。這�&創建乙縮醛化的組蛋白一個被標記的範圍在膠凝體在HATactivity 的位置。檢測被標記的組蛋白, 他們沖走無反應的acetyl CoA, 那麼服從了膠凝體對flurography 。

帽子活動的這個首字母確定由Allis 和同事跟隨進一步使用一個分子克隆技術學�&更多關於p55 和其基因。首先他們進一步淨化了帽子活動, 使用標準生物化學的技術。一旦他們重要淨化了帽子活動對同質性, 他們隔絕足夠它獲得一個部分氨基酸順序。使用這個順序他們設計了對氨基酸順序的部份編碼和雜交因此對macronuclear genomic DNA 的一套退化oligonucleotides (或對蜂窩電話核糖核酸) 。使用這些oligonucleotides 如同底漆, 他們執行了PCR, 然後被克隆PCR 產品。他們獲得了一些的基本的順序被克隆的PCR 產品和檢查他們驗證內部零件對已知的帽子氨基酸順序並且被編碼。無PCR 克隆包含了完全DNAS, 這些工作流程如此延伸了他們在5' 和3' 方向, 使用賽程式或DNA 末端的迅速放大作用。(參見賽繪製為進一步解釋) 。賽跑技術

Allis 和同事使用了他們cyclized DNA 這個5' 賽程式的一個被修改的版本因此他們能使用內部底漆為轉接和反向PCR 飛沫。這個把戲給他們避免盯梢第一子線DNA 的3' 末端與終端transferase 。終於, 他們獲得了輸入充分的421 氨基酸p55 蛋白質的DNA 克隆。

氨基酸順序從p55 DNA 的基本的順序被推斷與酵母蛋白質的氨基酸順序是非常相似稱Gcn5p. Gcn5p 被辨認了作為酸性副本活化計轉接方譬如Gcn4p, 因此氨基酸順序相似性建議p55 和Gcn5p 是被介入在基因起動的帽子。驗證, Gcn5p 有帽子活動, Allis 和同事用E. 桿菌表達其基因, 然後被服從它和p55 對SDS-PAGE 活動膠凝體檢驗。兩蛋白質被顯示清楚的帽子活動。因而, 至少一個帽子(Gcn5p) 有帽子和副本co 活化計活動。看起來充當在基因起動的一個直接角色由乙縮醛化組蛋白。

p55 和Gcn5p 是型帽子(帽子和) 存在在中堅力量並且明顯地被介入在基因管理規定。他們乙縮醛化核心組蛋白在他們的lysine-rich N 終端尾巴。這些是dustunct 從型B 帽子(帽子Bs) 被查找在細胞質和乙縮醛化新建被綜合的組蛋白H3 和H4 因此他們可能適當地裝配入nucleosomes 。acetyl 組添加了由Bs 以後被去除在中堅力量被組蛋白deacetylases 的HAT 。所有知道的帽子和, 包括p55 和Gcn5p, 包含一bromodomain, 當所有已知的帽子Bs 缺乏bromodomain 。因為帽子和被介入在乙縮醛化組蛋白在chromatin, 但帽子Bs 裡不, bromodomain 也許幫助帽子作為困境對chromatin 。

看見 DNA 分子在3 維數

脫氧核糖核酸