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我們知道□什麼實際上; 為真相在在深淵。~Democritus, (原子的c. 420 BCE) 希臘哲學家和發現者。
DNA 降雨雪使用鹽和對氨基苯甲酸二是一個常用的協議在實驗室為集中核酸譬如DNA 和核糖核酸。基本的方法是鹽並且對氨基苯甲酸二被添加來水溶液, 強制核酸沉澱在解決方法外面。被沉澱的核酸和洗滌的Ccentrifugation 隔絕核酸從解決方法的剩餘。核酸包含藥丸然後被洗滌與寒冷70% 對氨基苯甲酸二取消鹽。
然後第二個離心法步驟使用隔絕核酸從對氨基苯甲酸二允許對氨基苯甲酸二被取消。核酸藥丸然後讓烘乾, 和然後被重新懸掛在新含水T (Tris) 緩衝或水中。
一必需首先瞭解為什麼核酸是可溶解在水中。
水(H2.O) 是有一個部分負電荷在氧原子附近適當unshared 成對電子的一個極性分子, 和部分正電荷在+ 原子附近。
由於這水、其它極性分子譬如DNA 或核糖核酸的極性本質能靜電地與水分子相處融洽, 給他們容易地溶化在水中。
降雨雪中斷這交往和創建新的, 允許DNA 或核糖核酸從解決方法出來和容易地被隔絕。
在協議的鹽的角色是中立化充電在核酸的糖磷酸鹽中堅是否DNA 或核糖核酸。常用的鹽在DNA 和核糖核酸降雨雪包括鈉醋酸鹽。
在aqeous 解決方法, 鈉醋酸鹽破壞Na+ 和[ CH3COO ] - 。positively-charged 鈉離子中立化negatively-charged 中堅在DNA, 特定PO3- 組在核酸, 做核酸分子遠較不親水, 和因此較不可溶解在水中。
靜電吸引力在Na+ 離子在解決方法和PO3- 離子之間由Coulomb s’法律口授, 由解決方法的介電常數影響。水有一個高介電常數, 使它相當困難使Na+ 和PO3- 一起來。對氨基苯甲酸二另一方面有一個更低的介電常數, 使它容易對Na+ 與PO3 相處融洽-, 保護它’s 充電和製造核酸較不親水, 造成它退出解決方法。
核酸acid/salt/ethanol 混合物的孵出在低溫(即-20 或-80C) 公用被援引在協議當有必要在協議。核酸然而在濃度一樣低像20ng/mL 將沉澱在0-4C 因此孵出15-30 分鐘在冰是充足的。
這個協議的目標是沉澱DNA, 因為命名認為。這被耦合與酚三氯甲烷提取和通常被使用作為淨化核酸方式。這可能並且被使用作為方法為更改什麼解決方法或緩衝您的核酸是在。
這個協議並且運作為核糖核酸降雨雪(作為關心對我們RNAse 自由材料在這種情況下) 。
-20.C 一時數發揮作用優良更大的(細菌文化, 質粒1mL) 數量DNA
DNA 藥丸總不�&是可視根據多少DNA 您沉澱。那麼總作為關心在裝載他們面對的您的範例在離心機記住方向。DNA 藥丸將是在管部分面對離心機的超出。
這個協議將沉澱所有核酸, 不僅DNA 。如果您不想要核糖核酸在您的範例, 許多方式的當中一個處理它將簡單重新懸掛在TE + RNAse 在最後步驟和留下它在室溫為15mins-1hr 。
如果鹽沉澱, 它可能被洗滌容易地取消與70% EtOH 。DNA 不�&溶化在室溫,
但鹽將。(這可能並且使用去除CsCl 。我比透析查找幾次洗滌與70% EtOH 容易當我必須從質粒去除CsCl prep 。注: 不要變冷當去除CsCl, 有解決方法一個高溫系數。)
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