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原生質體隔離協議



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原生質體隔離協議

原生質體

新陳代謝能幹原生質體的準備

 

Saji Menon和Vibha Tyagi
科學研究，雕像圈子，齋浦爾(拉賈斯坦)，印度Birla學院

 

對於原生質體隔離是必需的材料

  • 70%對氨基苯甲酸二
  • 0.1%昇汞
  • 0.5M甘露醇

 

  • 酵素解決方法：
  • 1%纖維素酶0.25% Macerozyme R-10
  • 27.2 mg/l KH2PO4
  • 101 mg/l KNO3
  • 1480 mg/l CaCl2.2H2O
  • 246 mg/l MgSO4.7H2O
  • 0.5M甘露醇(酸碱度5.6)

 

  • 電池原生質體洗滌的媒體：
  • 0.5M甘露醇(酸碱度5.6)
  • 27.2 mg/l KH2PO4
  • 101 mg/l KNO3
  • 1480 mg/l CaCl2.2H2O
  • 246 mg/l MgSO4.7H2O
  • 被修改的原生質體培養基       

(表下面是列出的)

 

新陳代謝能幹原生質體的準備的協議

  • 採取從4-5個星期的無菌生長工廠的新鮮的葉子。
  • 表面在對待跟隨的70%對氨基苯甲酸二消毒與1分鐘的0.1%昇汞。
  • 十分地洗滌葉子與不育的蒸餾水。
  • 剝葉子組織的更低的表皮并且安置它在0.5M甘露醇解決方法在petriplate的一時數。
  • 去除甘露醇解決方法并且用被過濾消毒的酵素解決方法替換它。
  • 孵化在黑暗的牌照16-20時數在25oC。
  • 使用0.45µM尼龍膜，由濾清分隔原生質體層。
  • 分離濾出液在1000g 10分鐘在4 oC。
  • 去除上層清液并且重新懸掛在電池原生質體洗滌的媒體的藥丸。
  • 分離在1000g 10分鐘。
  • 兩次重複第9步。
  • 最終暫停原生質體藥丸在密度1*105 ml/l在被修改的原生質體培養基。
  • 優良鍍原生質體作為在petriplates的薄層。
  • 孵化牌照在25 oC在黑暗。

 

被修改的原生質體培養基

S.No.

組成部分

金額

A

天然鹽

 

1

硝酸銨

82.5 gm/l

2

硝酸鉀

95.0 gm/l

3

硼酸

1190 mg/l

4

鉀二氫的磷酸鹽

34 mg/l

5

碘化鉀

166 mg/l

6

鈉鉬酸鹽

250 mg/l

7

鈷氯化物二水合物

25.0 mg/l

8

氯化鈣二水合物

88.0 gm/l

9

硫酸鎂七水混合物

74.0 gm/l

10

錳硫酸鹽四水化合物

4460 mg/l

11

硫酸鋅七水混合物

1720 mg/l

12

硫酸銅五水合物

25.0 mg/l

13

乙烯Diamino四乙酸二鈉鹽

7.45 gm/l

14

硫酸亞鐵七水混合物

5.57 gm/l

B

糖

 

1

葡萄糖

30.0 gm/l

2

核糖

0.5 gm/l

3

甘露糖

0.5 gm/l

4

山梨糖醇

0.5 gm/l

C

有機酸

 

1

鈉丙酮酸鹽

5.0 mg/l

2

檸檬酸

10.0 mg/l

3

蘋果酸

10.0 mg/l

D

維生素

 

1

硫胺氯化物

100 mg/l

2

煙碱

500 mg/l

3

吡哚素氯化物

500 mg/l

4

鈣泛酸鹽

250 mg/l

5

生物素

100 mg/l

6

抗壞血酸

75.0 mg/l

7

核黃素

50.0 mg/l

8

肌醇

100 gm/l

E

激素

 

1

2,4Dichloro含苯氧基的乙酸(2,4-D)

0.5 mg/l

2

苯基氨基嘌呤(小麵包)

1.0 mg/l