Bioinformatics, 协议, DNA 核糖核酸蛋白质Proteomics
家庭 > transfection > index.php
家庭 > transfection > index.php
 |
|---|
给我但站立, 和我将移动地球的一个固定地点在。~Archimedes c.287 - 212 BC 。
这个Transfection 站点是您的门户为所有事与电池以DNA 质粒或传染媒介, 核糖核酸是否siRNA 或RNAi, 甚至再组合蛋白质的transfection 有关。我们提供您以所有背景信息、协议为电池transfection, 优化和分析步骤, 和电池transfection 排错信息成为最后专家!
Transfection 描述杂质的简介入eukaryotic 电池使用病毒传染媒介或调用其它方法。
术语transfection 为非病毒方法是经常被使用的关于哺乳细胞, 当术语转换更喜欢描述非病毒DNA 调用在细菌和非动物eukaryotic 电池里譬如真菌、海藻和工厂。
动物电池的Transfection 典型地介入打开临时毛孔或' 漏洞的在电池血浆膜, 允许物料举起。基因(譬如supercoiled 质粒DNA 或siRNA 构建), 甚至蛋白质譬如抗体, 也许是transfected 。除electroporation 之外, transfection 可能由混合执行负离子油脂以物料生产liposomes, 熔化与电池血浆膜和放置他们的货物里面。
transfection 的原义是' 传染由转换', 即DNA (或核糖核酸) 从真核病毒或噬菌体的简介入电池, 造成传染。由于术语转换有其它感觉在动物细胞生物学(一个基因变化允许长期传播在文化上, 或获得财产中特点癌细胞), 术语transfection 获取了, 为动物电池, 其一个变化的当前含义在电池属性上导致通过DNA 介绍。
Transfection 是实验DNA 也许被投入入一个被开化的哺乳细胞的方法。这样实验通常执行使用被克隆的DNA 包含编码序列和控制区域(促进者, 等) 为了测试是否DNA 将被表达。因为被克隆的DNA 也许广泛地被修改了(例如, 蛋白质束缚位置在促进者也许被修改了或被去除了), transfection 经常使用测试是否特殊修改影响基因的功能。
Transfection 绘制:
能力综合核糖核酸在实验室里对许多技术至关重要。Radiolabeled 和非radiolabeled 核糖核酸探针必需为许多协议, 并且他们可能容易地被综合在小规模体外副本回应允许他们的用途在污点杂交和核酸酶保护检验。
体外副本要求一块被净化的线性DNA 模板包含促进者, 核苷酸triphosphates, 包括DTT 和镁的缓冲系统
体外副本要求一块被净化的线性DNA 模板包含促进者, 核苷酸triphosphates, 包括DTT 和镁的缓冲系统
有介绍外部DNA 各种各样的方法入一个eukaryotic 电池。许多材料被使用了作为承运人为transfection, 可能被划分成三种类: (负离子) 聚合物、liposomes 和nanoparticles 。
最便宜的(和最少可靠) 方法的当中一个是transfection 由钙磷酸盐, 由F. L. Graham 和A. J. van der Eb 原始发现在1973[citation 需要] (参见也[ 1 ]) 。HEPES 缓冲的盐解决方法(HeBS) 包含磷酸盐离子与氯化钙解决方法被结合包含DNA 是transfected 。当二被结合, positively-charged 钙和negatively-charged 磷酸盐的美好的沉淀物将形成, 束缚DNA 是transfected 在其表面。沉淀物的暂挂然后被添加来电池是transfected (通常细胞培养增长在单层) 。由进程不整个地被了解, 电池占去一些沉淀物, 和与它, DNA 。
其它方法使用高度分支的有机化合物, 所谓的dendrimers, 束缚DNA 和让它进入电池。一个非常高效率的方法是DNA 的包括是transfected 在liposomes, 即与电池结构是在一些方面相似, 可能实际上熔化与细胞膜的小, 膜跳起的机体里, 释放DNA 入电池。为eukaryotic 电池, 油脂正离子根据transfection 更加典型被使用, 因为电池是更加敏感的。
其它方法是对负离子聚合物的用途譬如DEAE 葡聚糖或polyethylenimine 。negatively-charged DNA 束缚对polycation 并且复杂由电池占去了通过endocytosis 。
对transfection 的一个直接途径是基因枪, DNA 被耦合对"然后被射击" 直接地入目标电池的中坚力量。一种惰性固体(公用金子的) 的nanoparticle DNA 可能并且被介绍入电池使用病毒作为承运人。在这些情况下, 技术叫做病毒转导, 并且, 电池被认为transduced 。
transfection 其它方法包括nucleofection 、electroporation 、热震动、magnetofection 和私有的transfection 试剂譬如Lipofectamine, Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene 或DreamFect 。
为transfection 的多数申请, 它是充足的如果transfected 基因临时只被表达。因为DNA 被介绍在transfection 进程中通常不被插入入核染色体, 外部DNA 丢失在最新阶段当电池接受有丝分裂。如果这是渴望的transfected 基因实际上保留在电池的染色体并且其女儿电池, 一稳定transfection 必须发生。
完成这, 其它基因是co transfected, 给电池一些选择好处, 譬如抵抗往某一毒素。一些(非常少数) transfected 电池, 偶然, 插入了外部基因入他们的染色体。如果毒素, co transfected 基因提供抵抗, 然后被添加来细胞培养, 只有那些少量电池与外部基因被插入入他们的染色体能激增, 当其它电池将死。在施加有一段时间了这选择压力以后, 唯一电池与一稳定transfection 依然是和可能进一步培养。
公用座席为稳定transfection 是Geneticin, 亦称G418, 是毒素可能由新霉素抗性基因的产品中立化。
体外副本要求一块被净化的线性DNA 模板包含促进者, 核苷酸triphosphates, 包括DTT 和镁的缓冲系统
寄发这页到朋友
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
