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siRNA转染

siRNA转染协议

 siRNA转染协议： Transfect 6个好的牌照

  1. 适用第一种siRNA处理，当电池是60%汇合时(与电压表的评定confluency); 在星期五在星期三，镀1.5x10^6电池， transfect。 为其中每一井：
  1. 稀释2.5 ug siRNA (20uM是近似0.26ug/ul。 9.62 ul每很好一个6-well牌照)与对100 ul的一个最终数量的培养基。 使用障碍吸移管技巧。 如果所有井transfected与同一siRNA，您能做主要混合。 执行此在一支不育的被真空加热的塑料管。
  2. 添加12 ul RNAiFect (Qiagen -或其他核糖核酸转染试剂，参见制造商的协议)每支siRNA mastermix管并且轻轻地混合。
  3. 孵化在15分钟在室温允许在siRNA和油脂之间的复杂形成。
  4. 吐气从电池的媒体并且很好添加900ul新媒体到其中每一。
  5. 逐滴地添加siRNA混合物(112 ul每口井)，当轻轻地打旋的牌照时。
  • 以后适用第二种siRNA处理2天，从事概述的步骤以上。 第二转染将添加到基因的减少表达式利益。

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