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科学自杀当它采取一个信条。~Thomas 亨利·Huxley
由Moleculardude 写和更新2008 年3月。版权2007/2008 。
定义: SDS-PAGE 是对钠dodecyl sulfate (SDS)聚丙烯酰胺胶凝体电泳法的 缩写。
SDS-PAGE 是一个分子生物学技术由范围使用相应地分离蛋白质。SDS-PAGE 可能还分离DNA 和核糖核酸分子。
在什么大概是解决蛋白质混合物的最强有力的技术, 蛋白质暴露于离子洗涤剂SDS (钠dodecylsulfate) 在和在胶凝体电泳法期间之前。 SDS 弈质蛋白质, 导致multimric 蛋白质离解入他们的亚单位, 并且所有多缩氨基酸链子是牵强的入延长的相应一致以相似的charge:mass 比率。 SDS 处理消灭因此差额的作用在形状上的以便链长, 反射质量, 是蛋白质的迁移率的单一定列式在SDS- 聚丙烯酰胺电泳法。
不同在分子量由少于的链子百分之10 可能由这个技术分离。 而且, 蛋白质的分子量可能由与运行在同样胶凝体的蛋白质梯子或分子量梯子的比较确定。
(参见图1)
图1 。这个丙烯酰胺胶凝体被使用分离蛋白质。色的地点是标准范围标记, 是prestained 。这通常使用做西部污点。蛋白质调用到膜和然后被检测与抗体对特定蛋白质。
SDS-PAGE, 钠dodecyl sulfate 聚丙烯酰胺胶凝体电泳法, 是技术使用在生化、遗传学和分子生物学分离蛋白质根据他们的电泳流动性(多缩氨基酸链子或分子量的长度的功能并且高阶蛋白质可折叠、posttranslational 修改和其它系数) 。
蛋白质的解决方法被分析与SDS, 弈质附属和非二硫化物被链接的三重结构的一种–负离子–洗涤剂首先被混合, 并且向各蛋白质应用一个负电荷以其质量的比例。没有SDS, 不同的蛋白质以相似的分子量会移居另外由于在质量充电比率上的差额, 因为各蛋白质有一种等电位点和分子量特殊性对其主要结构。这为人所知作为当地页。添加SDS 解决这个问题, 因为它束缚对和展开蛋白质, 给一个近的统一负电荷沿多缩氨基酸的长度。
SDS 困境以大约1.4 g 的比例SDS 每1.0 g 蛋白质(虽然约束比率可能变化从1.1-2.2 g SDS/g 蛋白质), 给一个近似地统一mass:charge 比率为多数蛋白质, 以便距离迁移通过胶凝体能被预测直接地与唯一蛋白质有关的范围。一种跟踪的染料也许被添加来蛋白质解决方法允许实验者跟踪蛋白质解决方法的进展通过胶凝体在电泳运行期间。
电泳法是分离的一个技术, 或解决的分子在混合物在一个应用的电场的影响之下, 并且叫做 电泳流动性。 被溶化的分子在一个电场移动, 或移居以速度由他们的charge:mass 比率确定。 例如如果二有同样质量和塑造, 那个以更加巨大的净充电快速地将行动朝电极。 小分子的分离, 譬如氨基酸和核苷酸, 是对电泳法的许多用途的当中一个。 在这种情况下, 范例小下落被放置在滤纸或其它多孔基体小条, 由一个举办的解决方法被浸泡。 当一个电场被应用作为小条的末端, 小分子溶化了在举办的解决方法移动沿小条以费率对应于他们的巨大他们的充电。
由于不同在范围和形状的许多蛋白质或核酸有几乎相同charge:mass 比率, 这些大分子电泳法在解决方法导致不同的长度分子的一点点或没有分离。 但是, 蛋白质和核酸的成功分离可能由电泳法完成以各种各样的胶凝体(半固体暂挂在水中) 而不是在一个液体解决方法。 蛋白质的电泳分离最公用进行在聚丙烯酰胺胶凝体。 这些胶凝体被转换在一副眼镜板材之间由聚合丙烯酰胺单体的解决方法入polyacrylamidechains 和同时cross-linking 链子入一个半固体矩阵。 胶凝体的毛孔范围可能被调整变化聚丙烯酰胺和交互相联的试剂的浓度。
当蛋白质混合物向胶凝体和电流被应用被应用, 更小的蛋白质快速地移居比更大的蛋白质通过胶凝体。 移动速度被胶凝体s’毛孔范围和电场的纯度影响。 毛孔在一个高度被交互相联的聚丙烯酰胺胶凝体相当小。 这样胶凝体能解决小蛋白质和肽, 但大蛋白质不能行动通过它。
依照被提及, 蛋白质与SDS 被混合困境对蛋白质和弈质他们的附属和非二硫化物被链接的三重结构增加热的一种负离子洗涤剂。SDS 向各蛋白质并且应用统一负电荷以其质量的比例。
如果SDS 未被使用在分离, 蛋白质以相似的分子量不同地会移居在胶凝体由于在他们的质量上的差额对充电比率。因为蛋白质被分离使用电流和pore 胶凝体矩阵的范围, 在充电上的差额(除质量之外) 会充当在分离的一个角色。
一种跟踪的染料也许被添加来蛋白质解决方法允许实验者跟踪蛋白质解决方法的进展通过胶凝体在电泳运行期间。
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