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核糖核酸胶凝体

版权2007 年- 分子岗位

 

核糖核酸胶凝体电泳法的历史记录

核糖核酸胶凝体被使用数十年分离和定性地估计核糖核酸的质量被隔绝从范例。如果您不是肯定的什么核糖核酸是结算离开:

音像 倾听一个详细的核糖核酸解释! 并且参见我们的 核糖核酸 百科全书条款。

核糖核酸胶凝体电泳法- 背景信息

在核糖核酸范例的隔离以后, 被隔绝的核糖核酸准备的质量由电泳法通常估计在一个弈质的agarose 胶凝体。虽然结果是主要定性的, 您能获得关于核糖核酸的产量的一些信息。

弈质胶凝体被使用因为核糖核酸倾向于折叠在本身和形成广泛和稳定附属结构通过分子内基本配对。核糖核酸这个附属结构防止它移居主要根据其范围。

确信, 您包括核糖核酸正控制在胶凝体, 在案件, 您取得您能然后确定的异常的结果是否问题是与胶凝体或是有您分析的核糖核酸的一个问题。您能并且使用核糖核酸分子量标记, 核糖核酸范例知道是原封的, 或两个, 可能被使用为这个目的。

核糖核酸胶凝体形象化与ethidium 溴化物弄脏当ethidium 溴化物设置在核糖核酸分子的附属结构之间和允许核糖核酸被看见在紫外光之下。

核糖核酸由胶凝体电泳法 (通常 agarose 胶凝体电泳法) 分离。在运行核糖核酸胶凝体以后您能举办一个北污点以随后调用到膜、杂交以探针, 和最终检测。或简单(和更加快速), 污点为核糖核酸使用ethidium 溴化物或SYBR (或相似的染料- 好照原样无毒和更加安全的) 。

 

核糖核酸胶凝体的申请

因为北污点比核糖核酸胶凝体和实时PCR 是繁琐完成, 他们不被使用尽量核糖核酸胶凝体。

核糖核酸胶凝体电泳法和其差异被使用在分子生物学研究:

• 检测核糖核酸
• 检验为核糖核酸的质量被隔绝
• 考虑到核糖核酸数量或产量的常规确定
• 检验为核糖核酸退化

核糖核酸胶凝体不利

使用核糖核酸胶凝体电泳法不利有:

• 核糖核酸胶凝体不是非常定量的。您无法精确地确定核糖核酸产量或共计以标准。放射性方法譬如北弄脏或小点污点是更加准确的。
• 经常ethidium 溴化物被使用检测核糖核酸。Ethidium 溴化物是biohazard 照原样突变因素和含毒物。
• 核糖核酸胶凝体象紫外分光光度学或其它方法考虑到核糖核酸产量的一个快速确定然而一样快速地不是。

核糖核酸胶凝体好处

核糖核酸胶凝体好处有:

• 这是一个广泛被接受的方法
• 核糖核酸胶凝体非常快速和容易执行
• 您能检验为核糖核酸质量在1-2 时数之内
• 如果您使用SYBR 或其他无毒污点(即您不使用Ethidium 溴化物), 核糖核酸胶凝体是相当安全的。

核糖核酸胶凝体协议

验证您的核糖核酸完整性 您应该做"北污点 " 分析。为了完成这您必须运行一个弈质的胶凝体。

为微型胶凝体对核糖核酸用途Midi 胶凝体: 做50 机器语言100mL

为兆胶凝体做400 机器语言。

 

为100mL 胶凝体(最公用运行) 您需要添加agarose 1g 做1% agarose 解决方法。

 

连续缓冲食谱为核糖核酸胶凝体

准备:	500mls	750 mls	1.5 公升
1X E 缓冲(50X) 下面	10 机器语言	15 机器语言	30 机器语言
0.66M 甲醛(1/19 卷)	26.3 机器语言	39.5 机器语言	79 机器语言

核糖核酸弈质试剂

准备核糖核酸400ul 弈质试剂:

添加以下:

• 80% Foramide 被去离子的300ul
• 3.7 % 甲醛40 ul
• 1X 50X E 缓冲8 ul
• dH2.O = 400ul 52.ul

50 X E 缓冲每公升

添加:

• 0.9 M Na2 HPO4 二元127.8 g
• 0.1M NaH2PO4 一价的13.8 g

协议: 步骤在准备核糖核酸胶凝体

1. 投入agarose 在解决方法。
2. 加热准备的解决方法在组织被塞住的烧瓶里
3. 让冷静对60.C
4. 添加甲醛来等于0.66M 2.7 机器语言4.0 5.3 21.2
5. (添加Ethidium 溴化物如果您使用它到烧瓶)
6. 倾吐胶凝体(在敞篷里如果可能) 。
7. 加热2 ug 核糖核酸在75.C 10 min., 那么快冷却(这将允许核糖核酸弈质和停留唯一搁浅) 。
8. 添加: 核糖核酸2.5 卷弈质试剂
9. 添加装载染料1/10 卷来范例。
10. 装载范例agarose 胶凝体井。
11. 运行胶凝体(通常100V 伏特) 30minutes-2 几小时。(检查核糖核酸运行使用染料标记)

要诀为核糖核酸胶凝体

总运行您的核糖核酸agarose 胶凝体估计质量。不仅依靠唯一紫外分光光度学结果。

* 使用DEPC 被对待的水和被烘烤的玻璃器皿为所有步骤。缓冲必须任意是核糖核酸酶或使用Milipore 被净化的水如果您是在仓促。核糖核酸酶是到处! 佩带手套、用途唯一被烘烤的玻璃器皿, 或处女塑料。DePC 款待您的水, 缓冲(除了Tris) 。非常小心。

 

排错核糖核酸胶凝体

如果您当前有一个更喜欢的方法为运行核糖核酸, 继续使用它。

关于核糖核酸胶凝体的讨论和过帐问题或问题在 核糖核酸协议论坛。

核糖核酸胶凝体参考