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蛋白质确定技术

蛋白质可能是seperated 由第2 胶凝体电泳法和辨认以质量光谱

电池的蛋白质含量估计包括千位不同的类型蛋白质
以表达式的一个力学范围。当前被使用的技术介入蛋白质成分的检索, 这个非常复杂混合物的分馏,
各被分离的和被隔绝的种类, 广泛的质量光计测定的分析和最终符合结构数据酶解朊作用被生成反对知道的蛋白质或被期望的染色体表达式产品数据库。
这个程序介入初期使用1 或2-dimensional 电泳法(DE) 。使用1-DE, 蛋白质被分离根据分子质量; 技术是可再生的, 可能被使用为蛋白质在10 300 的质量范围–kDa, 但限制了解决方法。
为更加复杂的蛋白质混合物的分离, 2-DE 是更喜欢的方法。这介入分离蛋白质first 根据他们的净充电由一个等电位聚焦步骤和然后, 在第二维数, 根据他们的分子质量使用给高分离efficiency 的钠dodecyl sulfate 聚丙烯酰胺胶凝体电泳法(SDS-PAGE) 。
 质量光谱(女士) 是选择方法为identification
被分离的蛋白质, 和2-DE 和质量光谱
现在代表几一千蛋白质可能分离, 检测和identified 自动化的时尚的技术。
Proteomics 方法学由蛋白质分离和地点首字母完成由2-DE 被然后进行蛋白水解的消化产生肽片段混合物蛋白质的切除跟随利益。肽被质量光谱分析, 首字母使用MALDI-MS 为分子质量肽质量的确定和生成fingerprint 。如果数据库在这个状况下搜索产生模棱两可的结果, 第二个质量光计测定的分析, ESI-MS/MS, 使用生成被使用为更加严密数据库搜索的顺序信息。
从质量光谱被获得在对蛋白质文摘混合物的分析, 肽质量映射或肽质量fingerprint 即肽片段的分子质量, 可能被查明。经常, 如果氨基酸顺序是sufficiently 唯一和质量
准确性sufficiently 高, 质量映射可能使用搜索数据库12–15 成功辨认蛋白质没有对进一步分析的需要。如果, 然而, 数据库搜索导致模棱两可的结果, 那么更加进一步的女士分析, 介入对纵排质量光谱的用途(MS/MS), 连续被承担在各肽在混合物生成顺序, 或部分顺序, 以顺序货签著名, 为这些肽。这由对ESI-MS/MS19 的用途频繁地达到并且一个额外purification 步骤必须通常执行分离肽从也许是存在导致肽信号的稀释的盐和洗涤剂。

进一步数据库搜索与两个肽的分子质量
并且顺序货签信息应该导致毫不含糊的蛋白质identification 。