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Immunoprecipitation 协议
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解决困难Immunoprecipitation |
得知Immunoprecipitation |
版权2006 分子岗位
蛋白质洗净是重要的在您的蛋白质的描述特性利益。您的蛋白质的洗净允许一学习蛋白质的功能, 和其酶活动。Stuctural 信息从蛋白质可能并且被获得从被净化的蛋白质包括核磁共振, 3-D 信息譬如蛋白质结晶。
如此怎么你去净化蛋白质?
蛋白质可能由电泳法方法形象化和欣然区分。 论文胶凝体技术可能并且使用获得少量(微克) 的被净化的多缩氨基酸。 但是, 他们不提供很多被净化的蛋白质在他们的当地状态。 被净化的蛋白质的大量, 许多毫克等级, 是需要的充分地阐明他们的三维结构和活动他们的结构。 几一千蛋白质被净化了以有效的形式根据如此特性象范围、可溶性、充电和特定约束亲合力。 在各个步骤在洗净, 准备被检验为蛋白质的一个特别属性利益(即酶活动) 估计程序的效力。
蛋白质可能被分离从小分子由透析通过一个半渗透的膜, 譬如纤维素膜与毛孔。 分子有维数显着大于毛孔直径被保留在透析袋子、wwhereas 更小的分子和离子里面横放这样膜毛孔和涌现在透析在袋子之外。
更加有识别力的分离根据范围可能由胶凝体滤清色谱法技术达到。 范例向列的顶层被应用包括多孔小珠被做不能溶解但高度水合的聚合物譬如葡聚糖或(是碳水化合物) 的agarose 或聚丙烯酰胺。 Sephadex 、Sepharose, 和Bio-gel 是这些小珠的常用的商业准备, 是典型地直径100 个测微表。 小分子可能进入这些小珠但大那些不能。 结果是, 小分子被分配在水溶液在小珠里面和在他们之间, 但是大分子位于只解决方法在小珠之间。 大分子更加迅速地流经这列和首先涌现, 因为一个更小的数量对他们是容易接近的。 值得注意的是, 分子诞生次序从多孔小珠列是命令的撤消在胶凝体电泳法, 一个持续聚合物结构妨碍大分子的运动。 蛋白质的大量可能由胶凝体滤清色谱法分离比由胶凝体电泳法但以低分辨率的价格。
多数蛋白质的可溶性被降下以高盐含量。 这个作用, 叫做salting-out, 是非常有用的, 虽然不好被了解。 可溶性依赖性对盐含量与一蛋白质不同到另一个。 因此salting-out 可能使用分馏蛋白质。 Salting-out 是还有用的为集中蛋白质的稀溶液。
版权2006 分子岗位
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