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研究是攀登的进程胡同看如果他们是瞎的。~Marston 软化剂
在紫外Absorbance 附近是紫外Absorbance 在280 毫微米: 一台简单分光仪可能定量相当数量蛋白质在解决方法。 辐射吸收由蛋白质在近紫外取决于Tyr 和Tr 目录(和在程度上在相当数量Phe 和二硫化物债券) 。因而A280 很大地变化在不同的蛋白质之间(为一个1 个mg/mL 解决方法, 从0 4 [ 为一些富有酚基乙氨酸的羊毛蛋白质], 虽然多数值是在范围0.5–1.5) 。这个方法有其好处; 它简单, 并且范例可退回。是那如同它可以它并且有包括的不利, 干涉从其它发色团, 并且特定吸收值为被测量的蛋白质必须是坚定的。核酸的绝种在280 nm 区域也许是尽量蛋白质在他们的同样波长, 和因此, 核酸几百分比可能很大地影响吸收的10 次。
肽债券的吸收强烈是在紫外以最大数量在大约190 蛋白质 强的吸收在这些波长被使用了在蛋白质确定的毫微米。由于困难由吸收由氧气和常规分光光度表低输出造成在这个波长, 评定更加方便地被做在205 毫微米, absorbance 是大约半那在190 毫微米。多数蛋白质有绝种系数在205 毫微米为一个1 个mg/mL 解决方法30–35 和在20 和24 之间在210 毫微米。 各种各样的旁边链子, 包括那些Trp, Phe, Tyr, 他的, Cys, 见面了, 并且Arg (递减次序), 做对A205 的摊缴。这个方法好处包括简单和敏感性。范例可退回并且另外有在回应上一点变化在不同的蛋白质之间, 如此允许蛋白质的近绝对确定。这个方法不利包括必要为分光光度表的准确定标在紫外。许多缓冲和其它要素, 譬如heme 或吡哚醛组, 强烈吸收在这个区域。
参见我们的 蛋白质含量协议 和 蛋白质含量协议从其它实验室。
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