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分子生物学- 科学报价

有实际上二个事、科学和观点; 前产生知识, 后者无知。~Hippocrates (c460-c.377 BCE) 希腊医师。

分子生物学时事通讯!

蛋白质确定由UV 吸收协议

蛋白质确定由UV 吸收协议, (被修改从协议被Alastair Aitken 和Mich2ele P. Learmonth)

材料为紫外蛋白质含量

1 。0.1 M K2SO4 (酸碱度7.0) 。
2. 5 毫米钾磷酸盐缓冲, 酸碱度7.0 。
3. 非离子洗涤剂(0.01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl 。
5. 0.2-.m Millipore (Watford, 英国) 补白。
6. 紫外可视分光仪: 氢闪亮指示应该被选择为最大强度
在特殊波长。
7. Cuvets, 石英, 为< 215 毫微米。

蛋白质含量紫外方法

蛋白质的估计由Near UV Absorbance (280 毫微米):

1 。一个可靠的分光光度表是必要的。蛋白质解决方法必须被稀释在
缓冲对是在票据之内的准确范围(的浓度参见附注1 和2) 。

2 。蛋白质解决方法被评定可能是在大范围缓冲, 因此这通常是没有问题查找一是适当的为蛋白质也许已经是在特殊缓冲必需为洗净步骤或检验为酶活性, 例如(参见附注3 和4) 。

3 。评定蛋白质解决方法的absorbance 在280 毫微米, 使用知道是透明对这个波长的石英cuvets 或cuvets, 用解决方法的数量被装载充足盖光束通过的开口。

4 。值被获得将取决于cuvet 的路径长度。如果没有1 cm, 它必须是
由适当的系数调整。啤酒Lambert 法律声明那: A (absorbance) = ε = 绝种 ε 系数、c = 浓度在mol/L 和l = 光学路径长度在cm. 所以的c l, 如果 ε 为人所知, A 评定直接地给浓度, ε 是
正常引述为1 cm 路径长度。

5 。紫外absorbance 的实际值为被测量的蛋白质必须由某一绝对方法确定, 即, 被计算从氨基酸构成, 可能由氨基酸分析确定。紫外absorbance 为蛋白质然后被计算根据以下配方: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M
那里nw, ny, 和北卡罗来纳是Trp 、Tyr, 和Cys 残滓的数量在多缩氨基酸
质量M 和5690, 1280 年和120 是各自绝种系数为这些残滓(参见附注5) 。

参见 蛋白质含量协议从其它实验室。

其它蛋白质条款:

西部污点家庭

Immunoprecipitation 家庭

Bioinformatics, 协议, DNA 核糖核酸蛋白质Proteomics

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