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分子生物学- 科学报价

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分子生物学时事通讯!

Lowry 蛋白质检验协议

蛋白质含量确定由Lowry Prtoein 检验协议

材料

1 。复杂形成试剂: 准备在用途前由混合以下储蓄解决方法在比例100:1:1 (由卷), 各自地:
            解决方法A: 2% (w/v) Na2CO3 在蒸馏水里。
            解决方法B: 1% (w/v) CuSO4·5H2.O 在蒸馏水里。
            解决方法C: 2% (w/v) 钠钾酒石酸在蒸馏水里。

2 。准备2 N NaOH 。

3 。Folin 试剂(商业可利用): 用途以1 N 浓度。

4 。标准: 使用标准蛋白质(即, 迟钝的清液白蛋白分数V) 的储蓄解决方法包含2 mg/mL 蛋白质在蒸馏水里, 被存储冻结在 –20.C 。准备标准由稀释储蓄解决方法用蒸馏水如下:

储蓄解决方法 (.L) 0 2.5 5 12.5 25 50 125 250 500

水 (.L) 500 498 495 488 475 450 375 250 0
蛋白质conc 。 (.g/mL) 0 10 20 50 100 200 500 1000 年 2000 年

方法

1 。来0.1 机器语言范例或标准, 添加0.1 机器语言2 N NaOH 。水解在100.C 10 分钟在热化块或煮沸的热水锅。

2 。冷却水解物对室温和添加1 机器语言新鲜地混合复杂形成试剂。让解决方法站立在室温10 分钟。

3 。添加0.1 机器语言Folin 试剂, 使用漩涡搅拌机, 和让混合物立场在室温30–60 分钟(不要超出60 分钟) 。

4 。读absorbance 在750 毫微米如果蛋白质含量是在500 .g/mL 以下或在550 毫微米如果蛋白质含量是在100 和2000 .g/mL 之间。

5 。密谋absorbance 标准曲线作为首字母蛋白质含量功能和使用它确定未知的蛋白质含量。

Lowry 方法参考

根据协议由Jakob H. Waterborg 。

Lowry 等。 J. Biol 。Chem。193: 265-275 (1951)

蛋白质条款:

西部污点家庭

Immunoprecipitation 家庭

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