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生活长期是短小, 艺术。~Hippocrates c.460 - 357 BC 。希腊医师和医学的父亲。
Immunoprecipitation 是使用抗体特定对蛋白质从解决方法取消那些蛋白质的技术。抗体蛋白质复杂被沉淀在解决方法外面增加抗体约束蛋白质的一份不能溶解的表单。实例包括蛋白质A, 蛋白质G, Zysorbin 、Immunoprecipitin, 或第二抗体的添加对解决方法(参见绘制1 下面) 。
范例可能然后被洗涤在降雨雪和离心法以后。沉淀物可能然后运行在SDS-PAGE 胶凝体以蛋白质范例缓冲。通常蛋白质范例是radiolabeled 在电池病势渐退之前。这由通常添加做radiolabeled 氨基酸来电池。这使事简单当蛋白质容易地然后被检测在影片当运行在胶凝体作为地点将散发放射线和将暴露影片。您能然后估计为蛋白质的范围(在分子量以比较估量标准), 和数量(由比较被对待的范例或与数量标准) 。
而且, immunoprecipitation 程序并且允许不非常丰富或难检测使用西部污点蛋白质的浓度。IP 可能集中蛋白质由决定10,000 折叠当它可能采取电池lysates 的大数量和集中您的蛋白质利益入可能然后被使用为西部污点分析或其它方法的小沉淀物。
1) 分子量和数量的确定immunoprecipitated 蛋白质由SDS-PAGE 。
2) Immunoprecipitation 使用估计为蛋白质蛋白质交往。这由immunoprecipitation 为一蛋白质, 和然后弄脏做为其它蛋白质。
3) 蛋白质的综合的费率的量化在电池里由确定数量radiolabeled 蛋白质被做在特定时间期间。
4) Immunoprecipitation 启用对否则难检测蛋白质的浓度。
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Immunoprecipitation 协议
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Immunoprecipitation 协议目录(外部连结)
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解决困难Immunoprecipitation |
得知Immunoprecipitation |
根据immunoprecipitation 或IP 的申请, 您将想要使用不同的病势渐退缓冲。 病势渐退缓冲选择重要和依靠蛋白质的特性利益。
如果想要学习蛋白质或蛋白质蛋白质交往的phosphorylation, 您应该尝试Np-40 。
如果您学习蛋白质的总蛋白含量级别, 您应该尝试RIPA 。
RIPA 缓冲 给更低的背景在immunoprecipitation 。但是, RIPA 可能弈质一些蛋白质。如果您举办immunoprecipitation 试验学习蛋白质蛋白质交往, RIPA 不应该被使用当它可能打乱protein:protein 交往。
NP-40 缓冲 有一个更低的deanturing 的级别, 和因而被使用为phosphorylation 实验譬如看激酶活动。并且NP-40 被使用为蛋白质蛋白质交往。NP40 是一种非离子洗涤剂, 和是最常用的洗涤剂在电池病势渐退缓冲为immunoprecipitation 和西部污点。
preclear 步骤通常完成为immunoprecipitation 因为它降低相当数量未指明的蛋白质在电池lysate 。此外, 前结算并且取消抗体约束蛋白质的也许有可能的未指明的交往和高亲合力为蛋白质A, 蛋白质G, Immunoprecipitin, Zysorbin 的蛋白质 , 或任何不能溶解的表单您使用对拉下来您的抗体。一些研究员查找这个步骤多余和跳过这个步骤。尝试前结算第一次您尝试immunoprecipitation 。如果您的结果是相当清楚的, 设法跳过前结算下个实验和看见怎么它结果。
哪抗体您应该使用为immunoprecipitation? 通常Polyclonal 抗体被使用为immunoprecipation 。
抗体抗原复杂独自不不能溶解, ie. immunoprecipitation, 不是一个完全想法。抗体和他们的捆绑对抗原是可溶解在血液, 缓冲, 和在immunoprecipitation 实验期间。 什么使用沉淀在这些复杂之外是不能溶解的抗体约束蛋白质。蛋白质A 和G, 与细菌被隔绝了, 和束缚对抗体的恒定的区域。
不能溶解的抗体约束蛋白质实例被使用沉淀复杂在immunoprecipitation 是:
洗涤复杂做使用RIPA, PBS, IP 洗涤缓冲, 或其它缓冲根据什么您会想分析在IP 以后。RIPA 缓冲更加严密但是PBS 较不严密。
Immunoprecipitation 成功依靠抗体的亲合力为其抗原。 好immunoprecipitation 抗体将给您低背景当您分析范例使用其它技术在IP 以后。 不能溶解的抗体束缚的蛋白质被使用并且非常重要。Polyclonal 抗体是最佳的抗体使用然而被净化的monoclonal 抗体可能并且被使用。 检查您的抗体供营商看如果您的monoclonal 抗体被测试了为immunoprecipitation 。
| 线程数 | |||
| 线程数称谓/海报 | 前笔过帐 | 回复 | 视图 |
| 07-07-2008 下午08:46 | 3 | 1220 年 | |
| 01-01-2008 下午11:35 | 1 | 498 | |
| 12-22-2006 下午03:07 | 7 | 1968 年 | |
| 07-17-2007 下午08:15 | 1 | 686 | |
| 07-17-2007 下午08:08 | 3 | 908 | |
| 01-22-2008 上午11:03 | 0 | 566 | |
Immidiate dissappearing 范围在DNA 程序化胶凝体在银弄脏的
喂一个我的朋友面对有银色弄脏的一个问题程序化之后形成胶冻在哪些DNA 范例范围与标记一起范围是...
二个严密移居范围在SDS-PAGE 形成胶冻
你好。我现在不为什么仅我看见二个接近的移居范围在胶凝体sds 页为什么二个范围非常紧密? 通常我没有得到二个范围, 通常一个范围...
SDS 煮沸范例任何替代方法?
我不喜欢煮沸我的范例当我得到蛋白质综合并且运行在胶凝体的顶层附近如果您使用特定dyes/probes 您要... 的等
I rewet 膜在甲醇里... 是Ab 去?
在隔夜风险设法检测低丰盈蛋白质, 我的膜变干在边缘附近因此我rewet 它在甲醇里... 是我的Ab 没有...
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