Immunoprecipitation 协议

Immunoprecipitation 和协议。

基本的Immunoprecipitation 协议IP:

1 。对待您的电池

2 。收获电池由添加溶解缓冲500 uL, 刮和通过注射器21 测量针X5 时间均匀。

3 。举办三辛胺降雨雪(这将使用正常化如果您radiolabeled 电池即与S-35)

4 。前结算: 前清楚由添加X 2 uL 、鼠标或兔子或山羊 清液(X 是主要抗体被上升) 的动物种类的地方来整体范例和孵化在一台板转器30 分钟在室温。

5 。去除X 清液由孵化与30 uL immunoprecipitin 以30 分钟自转在室温。

6 。分离范例3 分钟在13, 000 转每分钟。

7 。在离心法以后, 添加主要抗体(X anti-Y 特定蛋白质 5 uL, Y 是抗体被上升在一个动物为您的蛋白质利益) 来supernatants 和隔夜孵化在4 摄氏度。

8 。添加immunoprecipitin 100 uL 来范例。您能替代使用Zysorbin (Invitrogen) 。(Zysorbin 要求对协议的一些次要变化)

9 。离心机在13, 000 转每分钟3 分钟。去除上层清液。

10 。洗涤药丸3 X 以1 机器语言冷的IP 洗涤缓冲(添加蛋白酶抗化剂来wah 缓冲在用途之前) 以震动5-10 分钟在各次洗涤之间。

11 。使用这个药丸运行在SDS-PAGE 胶凝体。您能添加SDS 范例缓冲(蛋白质装载缓冲) 来这和负荷在胶凝体直接地在煮沸以后。