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最卓越的发现由科学家做是科学。~Gerard Piel
一个简单程序为蛋白质含量的确定在解决方法是由布雷得佛的布雷得佛蛋白质检验(布雷得佛等, 1976) 首先描述。
蛋白质含量的估计重要迅速地和准确地做在许多蛋白质研究领域。布雷得佛检验成为了更喜欢的方法为定量蛋白质在许多实验室。这个技术比Lowry 方法简单, 快速地, 和敏感的。此外, 与Lowry 方法比较, 它是依于较少干涉由公用试剂和生物范例非蛋白质要素。
布雷得佛检验依靠染料Coomassie 的捆绑蓝色G-250 对蛋白质。
详细的研究表明, 自由染料可能存在以pKa 值是1.15, 1.82, 和12.4 的四不同离子形式。染料的三份被充电的表单占优势以酸性检验试剂解决方法, 更加负离子的红色和绿色形式有absorbance 最大数量在470 毫微米和650 毫微米, 各自地。相反, 染料的更加负离子的蓝色表单, 束缚对蛋白质, 有一个absorbance 最大数量在590 毫微米。
因而, 蛋白质的数量可能由确定估计相当数量染料以蓝色离子形式。这由评定通常达到解决方法的absorbance 在595 毫微米。
染料看上去欣然束缚对arginyl 和蛋白质lysyl 残滓。这种特异性可能导致在检验的回应上变化对不同的蛋白质, 是方法的主要缺点。原始布雷得佛检验显示大差异在回应在不同的蛋白质之间。对方法的几修改被开发克服这个问题。
但是, 这些更改常规导致经常是易受干涉由其它化学制品的一个较不健壮检验。结果, 原始方法由布雷得佛构想依然是最方便和广泛最常用公式化。二类型检验被描述得这里: 标准检验, 是适当的为评定在10 之间和100 蛋白质.g, 并且microassay, 检测在1 之间和10 蛋白质.g 。后者, 虽然更加敏感, 并且是有倾向对干涉从其它化合物由于最大的数额范例相对染料试剂以这检验的形式。
参见: 布雷得佛蛋白质检验协议
布雷得佛, 肛门。Biochem 。72: 248, 1976 年。
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