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蛋白质和抗体Microarray 芯片
获取分子和他们的限制
分析蛋白质列阵的最公用的表单是抗体的抗体microarrays (或抗体仿造物) 那困境特定抗原排列在一个载玻片在高密。lysate 通过在列阵并且一定的抗原被检测在洗涤以后。最大的挑战以这些方法生产辨认蛋白质利益和以高足够的特异性在高生产量时尚的试剂。 虽然抗体是选择传统试剂为检测蛋白质在复杂混合物, polyclonal 清液经常不是特定和是昂贵生产。并且, 生产高特定monoclonal 抗体常规hybridoma 方法是费时, 费力和昂贵(8) 。
几研究使用抗体最近进行了尽管阻碍在获得特定抗体。 在最大的研究的当中一个中迄今, Sreekumar 等察觉146 分明抗体在玻璃监控蛋白质数量的叠更在LoVo 冒号癌电池里。他们的结果显露了许多有趣的蛋白质的幅射线导致的管理规定, 包括p53, DNA 分段存储系数40 和45, 肿瘤坏死与系数相关的ligand, 并且下来被调控的蛋白质(58) 。
迄今, 多数抗体microarrays 导致了与几十二或几百商业可利用的多或mono-clonal 抗体。 虽然成千上万抗体是商业可利用的, 这个编号是不足的因为为多数蛋白质没有可利用的抗体。 情况许多抗体是葡基化的和包含大protein-based 支撑结构意味, 他们经常交叉起反应与超过一目标蛋白质。 这可能对很大数量假的正贡献(9) 。 如此其它问题获得高特异性抗体。
一个有抗体列阵的最巨大的问题是特异性。蛋白质经常是存在在一个非常大力学范围(106); 因而, 也许有高亲合力为一蛋白质的试剂, 但是低亲合力为另更将陈列更低的亲合力蛋白质的检测如果它是更加流行(9) 。一个组调查了115 很好被描绘的抗体抗原成对的–能力起反应在高密度microarrays 在被修改的载玻片。30% 成对显示了期望的线性关系, 表明, 抗体的分数是适当的为定量分析(33) 。许多组使用三明治检验避免这个问题。 三明治检验由察觉第一抗体在列阵和然后检测执行使用认可蛋白质的一另外部份的第二抗体。这个途径巨大增加抗原检测的特异性, 但要求, 最少二优质抗体为各抗原存在被检测(8) 。
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