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蛋白质和抗体Microarrays
附件
附有蛋白质坚实表面, 基体的表面必须被修改达到最大约束能力(8,27) 。 蛋白质附有芯片在蛋白质附件层(参见图3) 。 这块层典型地是随申请的本质变化的一部有机影片。 各种各样的材料被学习了包括agarose (39), 基于葡聚糖的水凝胶(40), 多孔聚丙烯酰胺水凝胶 亲水聚合物和polyamino 酸(41) 。
一个方便附件方法使用了硝化纤维素膜或多L 赖氨酸涂上了玻璃这样蛋白质能被动地被吸收表面通过未指明的交往(34,42,43) 。 附上蛋白质束缚表面在任意取向, 可能被洗涤在严密洗涤的情况下。 但是, 噪声级通常是高由于未指明的absorption/adsorption 。
一个更加特定和更强的附件由创建达到易反应的表面在共价地能交键对蛋白质的玻璃(31,36,26) 。 bifunctional 硅酮cross-linker 被使用形成自已被汇编的单层(SAM), 有一个功能组起反应以羟基组在玻璃玻璃表面, 并且是自由起反应以主要胺物组蛋白质或可能是更加进一步化工被修改到达最大特异性的其他组(44,45) 。 其它差异是金子上漆的玻璃(46,47) 。 金子上漆的芯片好处是, SPR 和质量光谱可能集成当探知方法监控回应的动力学, 并且辨认被获取的分子。
上述共价cross-linking 途径然而有不利。由于这样的事实易反应的ligands 并且存在在蛋白质旁边链子它是可能的, 他们的任意附件也许修改蛋白质的当地确认书, 减少蛋白质的活动, 或使他们不能进入对探针(8,27) 。
为了安置蛋白质uniformily 从芯片的表面, 蛋白质也许被熔化与高亲合力货签在他们的氨基或carboxy termini 。 以这个方法, 被固定的proteins/antibodies 是可能保留在他们的当地相应一致, 如此允许analytes 对蛋白质的有效的站点的高效率的存取。 这个方法是第一成功被展示与5800 融合蛋白质的附件包含他的货签一个镍上漆的载玻片(26) 。 其它亲合力方法譬如glutathione/GST 并且被使用了(48) 。
Streptavidin 基于的钳制方法广泛也被使用附有任何biotinylated 生物要素对列阵表面(49) 。
芯片支撑材料重要因为蛋白质对physiochemical 属性是高敏感的。 例如, 极性列阵化工被对待束缚对亲水蛋白质然而这样表面是不合适的为细胞膜蛋白质(即G 蛋白质耦合的感受器官) 如同他们拥有疏水域(9) 。
蛋白质不表现象核酸, 并且不同的蛋白质将表现用不同的方式何时暴露在同样表面化学。 不同的型表面化学因而将促进一些蛋白质的留成和将导致其他人的活动变性或损失。 所以, 表面化学适当的选择是重要因为这将允许不同的型被固定的蛋白质保留他们的附属和三重结构, 并且因而他们的生物活动。 这个问题被扩大化当不同的地点的数量在芯片增量, 作为那里也许是100 种不同方式固定100 不同蛋白质为了获得所有蛋白质的适当的可折叠和功能。 并且一个重大问题是因为多数蛋白质的功能当前是未知, 那么那里是没有方法实际上测试是否他们是工作在芯片(7) 。
其次: 蛋白质芯片发运方法
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