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PCR 聚合酶

选择正确的DNA 聚合酶由实验的目标确定。有浩大的相当数量商业可利用的anzymes 选择从那不同在他们的processivity 、耐热性和保真度。最公用的酵素被使用商业是Taq DNA 聚合酶亦称和, AmpliTaq® DNA 聚合酶。

AmpliTaq DNA 聚合酶

AmpliTaq DNA 聚合酶是高度被描绘的再组合酵素为PCR 。生产在E. 杆菌由Taq DNA 聚合酶基因, 如此保证伟大的纯净。它被供应和公用被使用作为5 U/μL 解决方法在缓冲的50% (v/v) 丙三醇里。

实际Properities: 酵素是94 kDa 蛋白质以是’’ 最高效率的在70. 80.C 范围的5 -3–聚化活动。它是难以置信地耐高温的, 与半衰期在35 40 分钟–95.C 。根据热量循环, 半衰期是大约100 个循环。PCR 产品使用这酵素将有唯一基本的突出物在各条被聚合的’ 子线的3 个末端(这可能被剥削至于使用以T/A 克隆传染媒介) 。

生物回应: DNA 聚合酶要求镁离子作为辅助因素和摧化一块被奘填的模板的扩展名回应在72.C 。四dNTPs 被使用延伸底漆和therby 复制目标顺序。并且被修改的核苷酸可能被合并PCR 产品。

活动: 这酵素有a 叉子象结构受抚养者, 聚化被提高, 5’-3’ 核酸酶活动。它拥有的活动允许它钛贬低顺流底漆和表明, circuka 目标应该线性化在放大作用之前。并且这个核酸酶活动被使用了在PCR 测量的一个萤光信号生成的技术。这酵素没有一固有3’-5’ exonuclease 或校对活动, 而是导致高产量amplicons 为多数申请。

AmpliTaq 金聚合酶

这酵素是一个化工被修改的AmpliTaq DNA 聚合酶, 反演性修改保留酵素非活动在室温。高温和低酸碱度促进冲销, 恢复酶活性。这些情况发生在Tris 缓冲的PCR 在92.–95.C (Tris Cl 被公式化对酸碱度8.3 在25.C 滴下在酸碱度之下7.0 上述90.C) 。AmpliTaq 金子被公式化执行同5 U/μL AmpliTaq DNA 聚合酶一样。所以, 热起动可能被添加来多数PCRs 被优选与AmpliTaq DNA 聚合酶由替代AmpliTaq 金子和添加一10 分钟, 95.C, pre-PCR, 起动步骤。

同样结果可能达到没有pre-PCR 起动步骤由添加一额外10 个或更多PCR 循环。在这些情况下, 酵素递增被激活在PCR 变性步骤期间。

也参见 PCR 聚合酶 一个优秀条款在PCR 岗位。