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对PCR 产品的分析

Agarose 胶凝体对PCR 产品的电泳法分析

对分析和快速和容易地解决PCR 产品, 3% NuSieve 能是被使用的GTG agarose (FMC Bioproducts, Rockland, 我) 并且1% Seakem GTG agarose (FMC Bioproducts) 胶凝体运行在或TBE (89 毫米Tris 硼酸盐, 2 毫米EDTA) 或TAE (40 毫米Tris 醋酸盐, 2 毫米EDTA, 酸碱度大约8.5) 。解决的DNA 范围由弄脏检测胶凝体与或大约ethidium μ溴化物0.5 g/mL, 被destaining 跟随以水或SYBR® 绿色1 (Molecular Probes Inc., Eugene, 或) 并且被拍摄最终在紫外照明之下。使用一架123-basepair (bp) 或1-kilobasepair (kbp) 梯子作为一个方便标记为产品的范围估计。

其它分析方法分析PCR 产品

有各种各样的其它探知方法可利用为PCR 产品分析, 譬如ethidium 溴化物弄脏了8–10% 聚丙烯酰胺胶凝体运行在TBE 缓冲, 南部的胶凝体或dot/blots, subcloning 和直接程序化, HPLC 分析, 和对96-well microplates 的用途, 命名一些。反向小点弄脏方法组合PCR 放大作用以非放射性的检测。萤光染料的简介对PCR, 与为PCR 产品的实时, 联机量化的一个适当的票据一起在放大作用期间导致了运动PCR 或定量PCR 的发展。定量PCR (QPC) 评定PCR 产品累计在回应的指数阶段期间和在放大作用变得脆弱, 即之前, 当试剂变得有限。ABI 棱镜7700 (应用的生物系统) 并且LightCycler (Roche 分子Biochemicals, 曼海姆, 德国) 是允许荧光持续监控或者或一次每循环的联合萤光检测设备。这些票据可能并且描绘PCR 产品由他们熔化的特性, 即, 歧视singlebase 变化从狂放类型顺序。最近被设计的Mx4000™ 复合定量PCR 系统(Strategene, La Jolla, 加州) 可能生成和分析数据为多个萤光实时QPCR 检验。