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膜杂交筛选图书馆

审查图书馆使用膜杂交

在温度和离子浓度的条件下被查找在电池里, DNA 被维护在一个双重(二搁浅的) 结构由氢键, 表单betwen A 和T 基础和在各条子线的G 和C 基础。DNA 套楼公寓可能被弈质入唯一子线由加热他们, 通常在稀释盐水(即, 0.01 M NaCl), 或由提高酸碱度在11 之上。如果温度降低和离子浓度在解决方法被提高, 或如果酸碱度被降下对中立地位, 在和G-C 基本的成对改革在补全唯一子线之间。

这个进程去由许多名字: renaturation, reassociation, 杂交, 锻炼。在核酸混合物, 唯一补全唯一子线(或子线包含补全地区) 将重结合; 区域他们的reassociation 是实际上未受影响的由noncomplementary 子线出现。这样的分子杂交可能发生在或DNA 或核糖核酸二条补全子线之间, 或在核糖核酸子线和DNA 子线之间。运用分子杂交在特定DNA 克隆的检测, 唯一搁浅的DNA 从再组合DNA 分子附有坚实技术支持, 公用硝化纤维素补白或被对待的尼龙膜。当解决方法包含single0stranded 核酸被烘干在这样膜, 唯一子线成为不可逆地一定对叶子大多基础可利用为杂交对一条补全子线的坚实技术支持有些。虽然化学如果这不可逆的捆绑不是好了解, 程序是非常有用的。膜然后被孵化在解决方法包含是补全对一些核酸一定对膜放射性地的被标记的唯一搁浅的DNA (或核糖核酸) 。

在杂交情况下(在中立酸碱度, 40-65 C 附近, 0.3-0.6 M NaCl), 这根被标记的探针杂交对补全核酸一定对膜。不杂交的任一根超额探针冲走, 和被标记的杂种由补白的自动射线照象术检测。再组合lamda virions 当前在E. 杆菌草坪的匾调用到一个尼龙膜被安置膜在陪替式培养皿的表面。许多病毒微粒在各块匾吸收对膜的表面, 但许多virions 保留在匾在营养琼脂的表面在陪替式培养皿包含很大数量各自的lamda 克隆被再生产在膜的表面。

原始陪替式培养皿被冷藏存储lamda 克隆的收集。膜然后被孵化在一个碱性解决方法, 打乱virions, 发行和弈质被浓缩的DNA 。膜然后被烘干, 修理再组合lamda DNA 对膜的表面。其次, 膜被孵化以一根radiolabeled 探针在杂交情况下。Unhybridized 探针冲走, 并且补白被服从对自动射线照象术。

一个地点的appearence 在autoradiogram 表明再组合lamda 克隆的出现包含DNA 补全对探针。地点的位置在autoradiogram 对应于位置在那特殊克隆形成匾的原始陪替式培养皿。因为原始陪替式培养皿仍然包含许多infectioua virions 在各块匾, 病毒微粒从辨认的克隆可能被收回为替换由排列autoradiogram 和陪替式培养皿和去除病毒微粒从克隆对应于地点。一个相似的技术可能是应用的为筛选质粒图书馆在E.coli 电池里。