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Maxam Gilbert 程序化

怎么DNA 程序化

DNA 程序化运用Maxam-Gilbert 方法

Maxam-Gilbert 程序化以DNA 这个方法程序化而不是综合DNA 在试管内和终止综合回应与链终止者, 这个方法开始与全长, 末端被标记的DNA 和劈开它与基本的特定试剂。如此怎么这个方法运作以氨基羟尿环基础, 仅同样原则适用于所有四个基础; 首先我们结束标记我们想要程序化的一个DNA 片段。

这可能是5’- 或3’- 结束标记。其次, 我们修改一基础。这里我们使用二甲基sulfate (DMS) 甲基化氨基羟尿环。(实际上, 这种试剂并且甲基化adenines, 但不是用方式那导致DNA 子线卵裂。) 和在链终止方法, 我们不想要影响每氨基羟尿环, 或我们将导致唯一不会允许我们确定DNA s 顺序’的微小的片段。所以, 我们做甲基化在导致平均数仅仅一甲基化的氨基羟尿环每DNA 子线的温和条件下。其次, 我们使用做二件事的一种试剂(哌啶): 它导致甲基化的基础的损失, 它然后伤DNA 中坚在失去的基础(apurinic 站点的) 站点。在这种情况下, G 在顺序中间甲基化了, 因此子线破损那里发生了, 生产被标记的三聚合物。

在其它DNA 分子里, 第一G 不能甲基化, 提升被标记的磷酸盐(基础和糖会丢失在化工卵裂) 。终于, 我们electrophorese 产品和检测他们由自动射线照象术, 正在链子终止方法。当然, 我们需要运行劈开在其它三个基础的三种其它回应。有几个方式做这。例如, 我们能减弱苷债券对腺嘌呤和氨基羟尿环与酸; 然后哌啶将导致depurination 和子线破损在两个和和Gs 以后。如果我们electrophorese 这A + G 回应在G 唯一回应旁边, 我们能获得和由比较。同样, 联氨打开thymine 和胞嘧啶圆环, 并且哌啶可能去除这些基础和然后中断DNA 子线在收效的apyrumidine 站点。在1M NaCl 面前, 联氨是特定为胞嘧啶唯一, 因此我们能运行这种回应在C+T 回应旁边和获得茶匙由比较。

版权分子岗位2006 年