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FACS

FACS 技术

休息的淋巴细胞包括许多功能亚人口, 与彼此被辨认和被区别根据电池表面蛋白质承继人有差别的表达式, 可能被检测使用特定抗体。

流Cytometry

为定义和定量淋巴细胞的一个强有力的工具是流cytometer, 检测和计数各自的电池通过在小河通过激光束。流cytometer 被装备分离辨认的电池称一个荧光被激活的电池整理者(FACS) 。这些票据被使用学习电池子集属性被辨认使用monoclonal 抗体电池表面蛋白质。各自的电池在混杂的填写心头由特定抗体首先标记由处理用特定monoclonal 抗体被标记用萤光染料, 或被被标记的反免疫球蛋白抗体跟随。被标记的电池混合物然后被强制以arger 数量的盐通过喷管, 创建液体一条美好的小河包含电池唯一地被间隔在间隔。因为各个电池通过激光束它驱散激光, 并且所有染料分子一定对电池将是激动, 将发萤光。

敏感多极光电管管检测疏散光, 提供信息关于电池的范围和粒度, 并且florescence 放射, 提供信息关于被标记的monoclonal 抗体捆绑和因此在电池表面蛋白质表达式由各个电池。在电池整理者, 信号通过回到计算机比单细胞被使用生成电荷, 通过从喷管通过液体小河在精确时间小河破坏小滴, 每个包含没有; 小滴包含充电可能从小滴主要小河然后偏转当他们通过在相反充电之间板材, 以便positively-charged 小滴被吸引对一块negatively-charged 板材, 并且反之亦然。这样, 电池的特定亚人口, 由被标记的抗体的捆绑区别, 可能被净化从电池的混杂的填写。替代, 耗尽电池的填写, 同样fluorochrome 可能被使用标记不同的抗体被指挥在标记蛋白质由各种各样的不受欢迎的电池类型表达。

电池排序

电池整理者可能被使用指挥被标记的电池对一种废通道, 保留唯一未贴标签的电池。当电池被标记与唯一萤光抗体, 数据从流cytometer 通常被显示以荧光强度的形式直方图对电池编号。如果二或更多抗体被使用, 每个被耦合对另外萤光染料, 那么数据是更加通常显示他形成一张二维分布图或作为等高绘制, 荧光一个洗染被标记抗体被密谋反对那一第二（个）, 以结果, 电池的填写标记与一抗体可能进一步由其标记细分与第二抗体。由审查很大数量的电池, 流cytometry 罐头给关于电池的百分比的定量数据负担不同的分子。因为FACS 技术的力量增长, 更多抗体被标记与分明萤光染料可能同时累进被使用。

三, 四和平衡五颜色分析可能由非常强有力的设备现在处理

FACS 协议