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情况是大家相信的一个简单语句。它是无辜的, 除非查找有罪。假说是没人想要相信的一个新颖的建议。它是有罪的, 直到查找有效。~Edward 出纳员
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"化工, 象所有其它活细胞, 微生物包括有机和无机氮气和矿物盐; 它是因此必要为了生长微生物, 那物质这些三组使可利用, 与氧气一起, 重要对所有生存结构寿命。最后某一相当数量湿气是绝对必要的。" (Besson 。)
食物为微生物增长准备被给一般用语营养素媒体。很大数量的微生物欣然将增长在或在容易地可利用的营养媒体, 作为牛奶、肉汤, 等。一些microorgan isms 有广泛不同的食物需求和需要为增长营养媒体广泛不同在他们的构成里。
但是, 有必须被运用在所有营养媒体准备至于对微生物的使用的几个一般规则。这些是简要, 那:
每个培养基必须
营养媒体的分类
培养基也许被分类和:
I. 自然媒体象发生在本质里, 即, 牛奶、土豆和其它蔬菜、肉和肉制品、血液和血液清液、蛋、土壤, 等。
II 。准备的媒体, 即, 被做在实验室里。这些是:
(a) 未知的化学成分; 即, 营养琼脂、明胶, 等。
(6) 综合; 即, 化学成分知道, 即, Giltay 解决方法为去掉的氮气的有机体。
或和:
I. 液体媒体。这些有:
A. 媒体由动物组织和流体, 即, 营养汤, 清液汤, 碳水化合物汤, 牛奶, 血液, 硝酸盐胨解决方法, Dunham 的解决方法被做。
B. 媒体由菜组织被做。在这些之中是: 麦芽膏(发芽的大麦), 啤酒麦芽酒, 酵母抽提物, 干草注入, 自然果汁, 酒(被发酵的果汁) 。
C. 综合媒体。
II 。坚实媒体。这些mav 被分类和:
A. 能液化, 即, 营养琼脂, 营养明胶。
B. 非能液化, 有: 1. 媒体液体在, 一旦变硬, 无法通过实际平均值, 即, 媒体液化准备从蛋白性的流体并且组织譬如蛋、血液清液, 等的一种自然状态但, 或综合媒体变硬了与钠硅酸盐。
2 。是坚实在自然状态, 即, 菜媒体譬如土豆、红萝卜、香蕉, 等的媒体。
执行3 。媒体的滴定法
细菌学媒体的滴定法由肉被做是一个重要步骤在他们的准备, 因为微生物对营养基体的回应是敏感的。
程序。以下方法被使用为实验室媒体, 除牛奶、麦芽酒、萍果汁、醋、果汁, 等之外。参见p. 22 。
1 。投入5 c.c 。媒体被测试和45 c.c 。蒸馏水在一个蒸发的盘。
2 。煮沸轻快一分钟以常数搅动(击退登记作为酸度) 的所有被溶化的二氧化碳。
$ 。添加1 个c.c. 酚酞解决方法为指示符。
4 。滴定当热, 更好地当煮沸, 与N/20 氢氧化钠, 或N/20 盐酸作为案件de mands. ' 微弱但分明永久性玫瑰色颜色标记终点。这个颜色应该依然是永久性五分钟。
5 。计算和记录媒体的回应在程度更加充分的缩放比例, 是正常立方centi 米的数量* 酸或碱当前在1000 立方体
* 解决方法被认为正常当它包含1 克等效alent 酸或基础在1 公升。
酸或基础的克等值是是等效的与或将中立化一价的酸1 克分子或星期一酸基础的那个数量。
系统的好处是那1 c.c 。任一正常解决方法将中立化或确切地确切地将是等值对1 毫克equiva 被借任一个酸或基础。(Noyes, Wm 。A., Chemistry 课本, 1913 年, p. 184 。)
媒体21 的滴定法
媒体的厘米, 使用酚酞当indi cator 。
6 。碱性媒体由安置表示a 减() 符号在程度之前的数量强碱性; 因而, 15 会表明, 媒体是15 碱性, 或15 c.c. 正常酸必须被添加每公升来中立ize 它。
酸媒体由安置表示a 加上(+) 符号在程度之前的数量酸度; 因而, +15 会表明, 媒体是15 酸或15 c.c 。正常碱必须被添加每公升来neu tralize 它。
实例。
玻璃量管读取在滴定5.4 c.c 以后。
玻璃量管读取在滴定2.0 c.c 之前。
c.c. N/20 NaOH 的编号被要求
中立化酸在5 c.c 。
媒体4 c.c 。
如果5 c.c 。媒体(是1/20 100 c.c 。) 要求
3 。4 c.c 。1/20 正常NaOH 中立化酸pres ent, 100 c.c 。媒体会要求20X3.4 c.c 。或68 c.c 。1/20 正常NaOH 。
因为一个正常解决方法是20 倍1/20 正常解决方法的纯度, 100 c.c 。媒体会需要1/20 68 c.c 。或3.4 c.c 。正常NaOH 为中立化; 并且一公升或1000 c.c 。媒体会要求10X3.4
c. c. 或34 c.c 。N/l NaOH 为中立化; 即, 媒体是34 酸。更加充分的缩放比例。这是媒体的公升。
当N/20 酸或碱和媒体的一个5 c.c. 部份(在45 c.c 。蒸馏水) 被使用, 各1/10 1 c.c. 对应于1 个更加充分的缩放比例。
回应的调整。如果它欲留下媒体与a, 即, +15 回应, 我们有:
22 将军微生物学
媒体的酸度
(+34) 3.4 c.c. 每100 c.c 。媒体
渴望的酸度(+15) 。．1.5 c.c. 每100 c.c 。媒体数量正常碱
被添加1.9 c.c. 每100 c.c 。媒体
或10X1.9 c.c. = 19 c.c 。N/l NaOH 每1000 c.c 。媒体
因为正常解决方法是相等的纯度由数量, 即, 1 c.c 。N/l 酸将中立化1 c.c 。N/l 碱, 它欣然将被看见如果15 c.c 。N/l NaOH 必需中立化酸当前在1 公升媒体, 那么那里必须确切地是存在在那公升15 c.c 。N/l 酸, 或我们应该说回应是(+ 15) 十五度酸的。为其他程度酸度添加足够的正常碱使酸度降低到点渴望。
媒体的回应更改有些在其中立化以后, 特别是在绝育期间, 而且在之后站立在普通温度。这更改是往增加的酸度, 和是最明显的在媒体富有在葡萄糖里。它结果是必要确定媒体的滴定量在它被使用而不是引述图被获得在绝育之前时候。
牛奶、萍果汁、醋、麦芽酒, 和果汁
程序。1 。入一个蒸发的盘评定5 c.c 。媒体被测试, 通过适当的吸移管。做50 c.c. 与蒸馏水。
不要加热。上述媒体不应该是激昂在滴定法之前, 当他们包含挥发性酸或也许登记作为酸并且也许由煮沸击退的其它有机物质,
2 。添加1 个c.c. 酚酞解决方法。
3 。添加, 逐渐, 从一支准确玻璃量管, IN/20 NaOH 直到第一永久性粉红色出现。
4 。注意数量NaOH 被要求为滴定法。
5 。总运行重复项。
牛奶23
6 。记录作为程度酸度会必需中立化一公升媒体N/l NaOH c.c. 的数量。
牛奶
牛奶有价值作为一个营养媒体为微生物因为: 它是一自然食物和几乎理想的为很大数量的微生物。其构成、averag ing 3.40% 油脂, 3.50% 酪蛋白和卵蛋白, 4.50% 牛奶糖, 0.75% 灰, 87.75% 浇灌, 是证据, 它装备食物以优秀形式为多数微生物。
许多细菌的生物化学的活动确定地显露他们自已在挤奶的更改, 特别是石蕊牛奶, 接受。许多这些更改scopically 是看的宏指令。这些是:
(a) 酸生产。乳糖, C^IfeOn (牛奶糖), 首先被倒置, 形成二个己糖分子, 1 mol 。葡萄糖和1 mol 。半乳糖。
并且己糖产量各个分子乳酸二个分子:
己糖= 乳酸。
C 6 H 12 6 = 2CH 3 CH(OH)COOH 。
蓝色石蕊被转动红色。
(b) 碱生产。石蕊成为更加黑暗的蓝色。这更改非常经常伴随peptonization 。
(c) 减少(石蕊的脱色) 。这归结于着色问题(石蕊的) 减少。许多微生物藏匿生产氢的酵素。氢与石蕊结合, 使它降低到其leuco 复合(无色) 。(Methylen 蓝色成为颜色较不下象情况。) 这是减少和不是破坏可以由震动展示被脱色的文化以几立方厘米与氢结合的gen peroxid 。并且脱色石蕊的细菌
24 将军微生物学
使氢peroxid 降低到E^O 和再氧化被减少的石蕊的出生氧气(显示由牛奶的reac tion 类型微生物当前) 。Re 氧化作用慢慢地发生在自然情况下。减少也许发生当牛奶是酸, 碱性或中立。
(d) 凝结通过酸生产。酪蛋白, 象多数蛋白质, 是两性的, 即, 它是能起反应两个作为微弱的酸和一个微弱的基础。否则不能溶解的酪蛋白被发现在牛奶在一个部分被溶化的状态(胶质), 由于其组合与钙盐: 与酪蛋白以前被结合的钙, 通过酸的生产由某些微有机体, 与乳酸现在结合; 结果酪蛋白沉淀物, 导致凝结(凝固) 。Lit mus 是断然被转动的红色。牛奶饮用酸凝乳将滴定在+50 之上。
(e) Rennet 凝乳。凝固也许并且发生当媒体是中立或唯一slightly^ 酸。凝乳的这赞成duction 归结于a rennet 象酵素由微生物生产, 和与rennet 的活动是相似用凝结牛奶在乳酪厂。
许多spore-forming 种类被查找在组rennet 生产的有机体之下。Rennet 凝乳被peptonization 通常跟随。
(/) Peptonization 。凝乳由酸或人净额形成的微生物生产也许逐渐消失, leav ing 唯一a 乳清象液体。这由生产蛋白水解的酵素消化凝乳和使它可溶解的某些细菌造成。坚实赞成teins 的这液化喜欢明胶、纤维蛋白、煮沸的蛋白、牛奶凝乳, 等, 归结于二个组酵素、蛋白酵素和胰蛋白。
动物机体的蛋白酵素行动只在一个酸媒体(存在在胃) 。
动物机体的胰蛋白行动只在碱性媒体(存在在肚腑) 。
石蕊牛奶25 的准备
pepsinand 胰蛋白象酵素由微有机体生产无法由他们的活动因而分离在某一回应媒体; 这变化随微生物的种类和以环境条件。牛奶的活力tonization 更加少有地通常发生在中性, 轻微地碱性, 或轻微地酸回应。
一些有机体蛋白胨化牛奶没有形成rennet 凝乳。
(g) 气体生产。这为描绘为气泡的mation 在牛奶, 和是accom 常规panied 由酸凝乳的形成。凝乳非常公用收缩, 造成乳清挤压。
执行4 。石蕊牛奶的准备
用具。新鲜分离或skimmed-milk; titra tion 用具; N/20 NaOH; 酚酞(指示符); 5 c.c. 吸移管; azolitmin, 2% 解决方法; 装载的漏斗; 少量公鸡; 不育的试管; 用具为蒸汽sterili zation 。
方法。1 。新鲜分离或skimmed-milk 应该用。全脂牛奶是不受欢迎的由于其脂肪含量。
2 。滴定和记录牛奶的回应。如果牛奶滴定在17 之上酸, 回应必须被调整到+15. 酸, 凝结或uncurdled 牛奶, 在neutrali zation 以后, 不做一个中意的营养媒体为微生物, 因此, 滴定量是在20-25 之上酸的牛奶应该被放弃。
新鲜的牛奶变化在酸度从12 到18 。牛奶以酸度在18 之上对酚酞和在18 它开始显示酸着色不会给一个令人满意的蓝色颜色与azolitmin, 。
3 。加2% Kahlbaum 的偶氮litmin 的一个标准解法。石蕊或azolitmin 仅仅被添加作为indi cator, 应该是充足的纯度至于不稀释牛奶在任一程度上。
26 将军微生物学
4 。周到地混合牛奶和azolitmin 和管, 使用大约8 c.c 。石蕊挤奶在各支管里。
注意。注意应该被采取防止牛奶与管的顶层联系, 因为它将导致棉花纤维遵守管。这也许由对"装载的漏斗的用途避免。"
5, 消炎由加热在流的蒸汽二十分钟在四个连续日。牛奶难消炎, 由于频繁地是存在的抗性孢子。如果它欲消炎更大的批量项目货签比在管里, 热化的时期应该被加长。
小心: 过度加热倾向于更改(caramelize) 牛奶糖。azolitmin 的颜色也许并且被毁坏。这些更改不是中意的。
执行5 。甘油土豆的准备
一定数量的产色素和致病性有机体在媒体上兴旺特别很好包含甘油。甘油倾向这些器官isms 增长的方式以不为人所知, 但它例如似乎直接地被运用为油脂(Bact. Tubercu losis 的) 建筑。
用具。大健康土豆; 圆柱形土豆刀子, 或黄柏钻眼工人; 普通刀子; 翻转者; 钠汽车bonate, 1: 1000 年解决方法; 甘油, 5% 解决方法; 大不育的试管, 或乳酪面粉糊土豆管; 吸收剂棉花或短小玻璃标尺; 1 根c.c. 吸移管; 蒸馏水; 用具为蒸汽绝育。
方法。1 。仔细地清洗一两个大土豆。
2 。通过一位圆柱形土豆刀子或黄柏钻眼工人, 土豆被剪切的磁道, 4 到6 cm 。长期和1.5 到1.8 cm 。直径。与一把普通刀子, 对分各个磁道由对角剪切以便各个片断类似在形状琼脂偏锋。取消所有皮肤的部份在这些片断。
3 。安置在翻转者和浸泡在稀释(1: 1000) 碳酸钠的解决方法* 二十四时数唯一。
* 碳酸钠被使用中立化土豆的自然酸。
甘油土豆的准备
27
4 。不要调用片断到甘油的5% 解决方法在水中另外二十四时数仅仅。
5 。安置在不育的管里准备如下: 选择额外大试管1.5 到2 cm 。直径和干净和干燥他们。安置吸收剂棉花或玻璃标尺0.5 cm 一个小片断。X2.5 cm 。在每个底部。塞住与棉花和消炎在通常方式。(乳酪面粉糊管需要被清洗和只被消炎。)
在介绍土豆片断之前, 添加大约1 c.c 。蒸馏水对各支管, 使用pi pette 。土豆不应该接触水。
6 。消炎由加热在100 G. 在四连续
几天二十分钟每个日。
图8 。土豆管。(Orig. Northrup 。)
小心: 时间陈述在3 和4 必须严密地被遵守对, 土豆将必须被放弃由于contamina tion 以抗性spore-forming 有机体。
参考
SMIRNOW, M. R.: 值glycerinated 土豆作为培养基。分。F. Bakt., II Abt., Bd 。41, p. 303 。
28 将军微生物学
执行6 。肉注入的准备
肉注入是普通营养媒体的基础, 作为汤、明胶和琼脂, 和并且很大数量的特殊营养媒体, 当糖汤, 等。
根据这些方向充足的肉注入前被削去做1 公升各个营养汤、明胶和琼脂。
用具。1.5 公斤(3 Ibs 。) 精巧切好的新鲜的瘦牛肉; 1500 c.c. 自来水; 3.5 公升agateware 桶; 大漏斗; 圆环立场; 清洗布料; 1 公升量杯; 三个不育的1 公升锥形烧瓶; 冰箱; 用具为蒸汽绝育(autoclav 更好) 。
方法。1 。来1.5 公斤精巧切好的, 新鲜的瘦牛肉在一个3.5 公升agateware 桶, 添加1500 c.c 。自来水, * 不周到地混合和允许站立在一个冷静安排(冰箱更喜欢) 十六到二十四时数仅仅。
2 。设置一个大漏斗在圆环立场和安置干净的布料片断在漏斗。安置一个量杯在漏斗之下。
3 。劳损肉注入通过干净的干酪包布, 周到地压出所有汁液。1.5 公升应该被收回。如果任一损失发生做1500 c.c., 使用自来水。
这收效的sanguineous 流体包含肉、可溶解盐、extractives 和上色问题, 首要血红蛋白的可溶解白蛋白。
4 。安置500 c.c 。肉注入在每个三个不育的1 公升锥形烧瓶。替换插件, 和加热在autoclav 在120 C. 三十分钟。这是一个更加安全的程序比热化一更久的时间在流的蒸汽。
在这热化期间白蛋白能凝结由热被沉淀。
_ 它有是查找必要和还更方便准备和消炎肉注入在之前进行与这准备这不同媒体在它是使用,
* 大约500 c.c 。水对各镑肉。
营养汤29 的准备
由于是几乎普遍地存在在切好的肉的抗性spore-forming 有机体; 时间经济并且是对价。除非消炎immedi ately, 肉注入快速分解由于微生物群落的丰盈和分集被获取在准备期间的各种各样的进程为市场。
注入由新鲜地切好的瘦牛肉被做将变化在酸度在+15 之间和+25 更加充分的缩放比例。如果回应是明显更低或更高, 微生物活动发生, 是, 或也许是, 有害对肉注入被使用媒体的食物值。
注入包含很少蛋白性的问题和首要包括肌肉、某些extractives, 和修改过的上色事态的可溶解盐与蛋白质一起轻微的跟踪由热没凝固。
执行7 。营养汤的准备
营养汤是标准液体被使用为cul tivating 的微生物。这是牛肉茶实际精读taining 的胨。胨, 可溶解蛋白质不能凝结由热, 被添加替换沉淀的被凝固的蛋白性的物质肉注入被消炎。盐加代替磷酸盐和碳酸盐, 一些被沉淀在调整媒体酸度由氢氧化钠。
普通营养媒体的回应被调整到大约+15 与酚酞作为指示符, 照原样被发现多数微生物增长最好在一媒体中立或轻微地碱性对石蕊。
当它必需营养媒体是清楚的, 蛋卵蛋白被减少到光滑的粘贴用水(或蛋的井跳动白色) 被添加。由凝固, 蛋卵蛋白去除所有小颗粒机械上suspen 否则会通过滤纸的sion 。
30 将军微生物学
这个进程是最高效率的当蛋卵蛋白coagu lates 慢慢地。
因为蛋卵蛋白开始凝固在大约57 C. 它是绝对必要的为媒体冷却到40-50 C. 在蛋卵蛋白的添加之前的好结果。
虽然蛋卵蛋白包含少量sol uble 问题不能凝结由热, 作为糖, extractives 并且矿物问题, 将为服务作为微生物食物, 其目的在营养媒体是主要为其clari fying 的活动。
用具。500 c.c. 不育的肉注入; 500 c.c. 自来水; 10 gms 。胨, Witte 的; 5 gms 。盐; 10 gms 。蛋卵蛋白(或一个蛋); 3.5 公升玛瑙商品桶; 滴定法用具; N/20 NaOH; N/l NaOH; 酚酞(指示符); 蒸馏水; 5 c.c. 吸移管; 大搅拌棒; 粗糙的平衡; 大煤气喷燃器; 大漏斗; 被打褶的滤纸; 装载的漏斗; 不育的试管; 不育的1 公升烧瓶; 用具为蒸汽绝育- 。
方法。1 。投入一个烧瓶的目录肉注入(500 c.c 。) 在玛瑙桶和添加500 c.c 。自来水。
2 。加1% Witte 的胨和0.5% 盐。
3 。添加10 gms 。与100 c.c 很好被混合了的蛋卵蛋白。自来水。(投入蛋卵蛋白在翻转者和加足够的水形成粘贴。搅动直到光滑。然后加残余的水。一个蛋* 好被摔打也许被替代。) 周到地混合所有。
4 。热在流的蒸汽四十五分钟或在autoclav 在120 C. 三十分钟。
5 。滴定与N/20 NaOH 。
6 。调整媒体的回应到+15 与正常NaOH 或正常HC1 。Retitrate 和再调整如果需要。
7 。Counterpoise 和注意重量。
8 。煮沸十五分钟在自由火焰, 搅动stantly 精读。
* 它不是必要加水来蛋。
明胶31
9 。均衡和恢复任一损失由蒸发与蒸馏水。
10 。过滤当煮沸的热的通过被打褶的滤纸早先洗涤了以1/2 公升开水。
11 。通过滤出液通过同样纸它是明亮和确切。
12 。装载三十不育的试管, 使用大约8 c.c 。这个媒体为各支管。投入残余的汤在一个大, 不育的烧瓶。
13 。加热试管和目录在流的蒸汽二十分钟在三个连续日。
14 。消炎一个大烧瓶汤, 加热二十分钟四个日在连续。
明胶
明胶是微生物学家的工具的当中一个。, 它符合二个目的: 作为微生物的一个唯一种类隔离使成为可能的一个坚实培养基, 一个技术设备, 和, 对藏匿蛋白水解的酵素的那些有机体, 它担当一种含氮食物物料。
明胶具有分别是第一物质被使用为一个坚实培养基。1882 年这个媒体是origi nated 由罗伯特·Koch 和有从革命化了微生物学科学。在坚实媒体的简介之前, 微生物的一个唯一种类的隔离几乎总介入了困难和不确定性某一评定。引述从乔丹: "这无法是仅仅巧合, 巨大发现在细菌学方面快速地随后了而来在这重要技术改善脚跟, 并且它是或许不是太多声称细菌学的上升从congeries 未完成虽然重要观察入现代生物科学的位置应该建于关于这个期间(1882) 。"
Koch 的第一块板材由倾吐的做了被液化
32 将军微生物学
营养明胶在玻璃不育, 平的片断。学员在熟悉前削去令人满意的板材困难以对"陪替式培养皿的" 用途将赞赏那些与在Koch 的第一块明胶板材里回面。
明胶是蛋白质, 即, 一种含氮食物物料。它包含当其重要要素碳、氢、氧气, 和氮气(其它要素, 然而, 譬如硫磺、磷, 等, 也许是存在) 。其经验主义的配方根据Schiitzenberger 和Bourgeois 是C7eHi24N24.O29, 但这样配方只提供首要组成部分的信息和允许你形成分子的巨大规模的某一想法; 分子的结构的想法不被给。但是, 由消化与稀释硫酸, 明胶划分以与蛋白质, 产生glycin 、leucin 和其它肥腻amino-acids 相似的方式。
明胶是动物蛋白质, 但做热发生作为明胶在动物组织。它存在那里作为是纤维状结缔组织首席坚实组成部分的albu minoid 胶原, 并且被查找, 但在更小的百分比, 在软骨、骨头和韧带。胶原从这些各种各样的来源不是相同的在构成里并且明胶相应地变化, 即, 明胶从软骨与那其它来源不同因为它包含氮气的更低的百分比。
明胶, 机体起因于胶原加水分解, 并且是硬朊。(Hofmeister 认为这加水分解进行根据等式:
胶原+ 水= 明胶
但与这样的可变构成打交道物质,
这种类经验主义的配方没有伟大意义) 。
商业, 它准备从某些种类骨头
并且皮肤的部份。这些被选择, 被洗涤和被提取
明胶33
被水和与稀释酸(氯化氢), 与rela tively 对热的一点暴露, 以便只有可能股票的流动性崩解产品被形成和总值解决方法的结冻的力量不被毁坏。
术语明胶从拉丁动词gelare 被派生, 凝结, 和叫介意这种物质首席属性, 那其僵住的或结冻的属性。
明胶属于物质那有趣的组叫做胶体。这是选件类的典型的实例, 和陈列选件类的典型属性。胶体, 在明显对比对结晶状, 欣然不结晶, 不散开和是不渗透性的互相。胶体最后微粒小比什么我们普通会命名实际细分, 仅相当主要比化工分子; 最小的颗粒的直径在一个胶质解决方法, 即, 红色胶质金子, 计数了通过超微范围, 是6 millimicrons 或一微米的6 千分之一。一微米是第一千分之一一毫米。(细菌是更大的, 最小可视通过普通显微镜是从直径0.3 到1.0 微米。) 他们的回应结果站立在实际和问题中间的化学变化, 和可以由考虑看见明胶属性。
明胶将吸收温暖的水(它的一个可观的数量是几乎不能溶解在冷水里) 并且胀大, 产生, 在热供应, 熔化对一个黏, 稠粘的解决方法再成胶状在冷却的果冻。水凝胶的名字向胶体被运用显示这个属性。普通明胶媒体为微生物学的工作包含12% 到15% 明胶。当烘干在媒体tem peratures, 明胶可能再被再溶解和确定地redried 。从这个属性这称反演性胶体与的其它胶体区别它, 当他们的实际状态一次被更改, 不能溶解, 即, 酪蛋白和硅的酸。
34 将军微生物学
如果superdried 在大约130 C., 或过热当在凝胶状状态或短时间在一个温度在100 C. 之上, 或长期在100 C., 和在相互mittent 绝育, 明胶是因此修改, 其再溶解的或resolidifying 的力量各自丢失。在superdrying, 再溶解的属性的损失被放置对构成微粒的太接近的联络, 一个变化在实际状态上; 在过热的明胶, resolidifying 的力量的损失大概归结于明胶分子的disintegra tion, 一种更加纯净地化工现象。gelatinizing 属性的这损失由许多微生物的酶活动造成和并且并且是崩解进程。
明胶拥有, 然而, 可观地变化在不同的情况下的液化点。普通, 媒体包含12% 到15% 明胶将液化或熔化在一个温度在附近24 到26 C., 再变硬ing 在8 到10 C. 对清楚, 透明果冻。结果, 明胶媒体也许被使用只为不要求一个更高的温度比22 到24 C. 为发展的有机体。过度加热在准备或绝育过程中将导致一可观降下液化点, 或许最后那么低, 媒体将是液体在室温(20 到21 C 。) 它欣然将被看见怎么后者明胶媒体不能得心应手被使用为有机体的isola tion 。几个数据将协助修理这在头脑里。
明胶变硬的属性变化在倒数比例以加热的时期在绝育期间的进程; 其液化点降低在平均数2 C. 在□时数加热在100 C 。这做得清楚为什么这样的必须被保重在明胶媒体的准备, 在这个媒体的分数绝育在流出的蒸汽, 并且为什么立即冷却是必要的aftei; 各分馏在其准备过程中。
明胶35
虽然温度在100 C. 之上比那是破坏性的对变硬的属性100 C., 它是可能消炎媒体包含12% 到15% 明胶在autoclav (7 到8 Ibs. Pressure) 在112 到113 C. 二十分钟或在15 Ibs. Pressure (120 C. 五分钟) 没有削弱其有用性作为一个坚实培养基。
对蒸汽的这个用途在压力下(干燥蒸汽) 是几乎必要在明胶媒体情况下影响sterili zation, 因为明胶, 从其源泉、方法的准备, 和最新负债对污秽, 几乎肯定包含或负担在其表面很大数量的非常抗性孢子。热化在100 C. 三十分钟在三个甚至四个或五个连贯日总不是高效率的, 因为这些孢子总不发芽在二十四时数之内在热化和, 提到数据上面, 它以后欣然被看见, 降低lique 派别点不将被考虑象微不足道在断断续续的绝育过程中。
明胶拥有使它重要为细菌学工作的其它属性: 即, 在明胶板材文化结露水以后普通不收集在陪替式培养皿的盖子(和与琼脂) 滴下在明胶的表面和因而磨灭殖民地的表单和导致被隔绝的殖民地成为沾染与邻居那些。存储这个媒体或在试管里或在板材里, 不育或接种, 因而使简单比与琼脂。
参考
范·DERHEIDE, C.C.: Gelatinose Losungen und Verflussigungspunkt der Nahrgelatine, 曲拱。F. Hyg., Bd 。30 日1897 年, 页82-115 。
36 将军微生物学
执行8 。营养明胶的准备
用具。500 c.c. 不育的肉注入; 500 c.c. 自来水; 150 gms 。明胶; 10 gms 。胨, Witte 的; 5 gms 。盐; 10 gms 。蛋卵蛋白(或一个蛋); 热水锅; 温度计; 3.5 公升玛瑙商品桶; 长式重的搅拌棒; 滴定法用具; N/20 NaOH; N/l NaOH; 酚酞(指示符); 蒸馏水; 粗糙的bal ances; 大煤气喷燃器; 大漏斗; 被打褶的滤纸; 装载的漏斗; 不育的试管; 不育的500 c.c 。锥形烧瓶; 用具为蒸汽绝育; 运行水浴或冰箱。
方法。1 。投入一个烧瓶的目录肉注入(500 c.c 。) 在玛瑙桶和添加500 c.c 。自来水。
2 。加15% 明胶、1% Witte 的胨, 和0.5% 盐来混合物。
3 。加热这个混合物在热水锅溶化明胶、胨和盐, 偶尔地搅动。
4 。冷却到40-50 C 。这是必要的。
5 。然后添加10 gms 。与100 c.c 很好被混合了的蛋卵蛋白。自来水。(投入蛋卵蛋白在翻转者, 加足够的水形成粘贴和搅动直到光滑; 然后加残余的水。一个蛋很好被搅拌也许被替代。) 周到地混合所有。
6 。热在流的蒸汽四十五分钟或在autoclav 在105 C. 三十分钟。
7 。滴定与N/20 NaOH 。
8 。调整媒体的回应到+15 与正常NaOH 或正常HC1 。Re 再滴定和调整如果需要。
9 。Counterpoise 和注意重量。
10 。煮沸十五分钟在自由火焰, 搅动stantly 精读。
11 。均衡和恢复任一损失由蒸发与蒸馏水。
12 。过滤当煮沸热的通过被打褶的滤纸
琼脂37
早先洗涤与1/2 公升开水。通过滤出液通过同样纸直到它是明亮和确切。
13 。装载三十不育的试管, 使用大约8 c.c 。媒体为各支管。划分余数成二个相等的部份和安置在不育的1/2 公升锥形烧瓶里。
14 。加热在流的蒸汽二十分钟在三个连续日。
15 。冷却明胶在运行水浴, 在各热化之后。必须被保重尽可能少加热明胶, 因为一部分的明胶的变硬的力量丢失以各热供应。
16 。消炎一个大烧瓶营养明胶, 热二十分钟在四个日在连续。
琼脂
琼脂或琼脂(从Malay 词含义"vege 表"), 被使用在一坚实培养基为细菌学工作做准备的物质, 是一条赞成输送管准备从各种各样的海草被查找在印度洋附近和在中国和日本水域中。这类型海草有几个公用名字, 当锡兰或Jaffna 青苔、孟加拉鱼胶, 等。各种各样的种类被使用为食物并且贸易是可观的。
Payen, 法国化学家-(about 1859), 获得了琼脂果冻从海草, Gelidium corneum, 以fol lowing 的方式: 海草被允许站立有一段时间了在盐酸的冷的稀溶液; 酸被漂洗取消了多次用水, 那么海草被安置了在氨的冷的稀溶液; 其次氨被被重复的漂洗取消了与冷水。在这个进程期间, 海草丢失了53% 其重量在矿物盐、上色问题, 和有机组成部分。剩余部份煮沸了在水中,
38 将军微生物学
在哪个进程期间菜果冻被提取了。解决方法因此获得倾吐了, 留下无用的沉积后边。这果冻是相同在存在在菜组织的构成方面象; 它象胶原在明胶的化工未被更改, 准备。商业琼脂由蒸发大概准备这个解决方法to.dryness 通过不同的平均值。
琼脂作为长期, 苗条, 灰色白色小条作为块通常进入细菌学家的手, 或, 或更加特别近年来, 以欧洲制造的形式一灰色白色战俘der 。
琼脂, 与明胶对比, 是碳水化合物, 即, 它包括碳、氢和氧气的组合唯一。氮气跟踪是存在作为杂质。其基本的constit uents 的上述定性确定由Hueppe 做了由Payen, 由Parumbaru 和, 做他们的确定在琼脂由不同的来源。只要能被查明, 其经验主义的配方未被调查在任何程度上。
象明胶, 然而, 琼脂是反演性胶体。它浸泡在冷水里, 溶化在热水在一长式煮沸以后对一个无味和无气味的清楚的解决方法, 和坚实ifies 在冷却对更或较少不透明的果冻。其含水解决方法是中立或几乎中立的对酚酞类; 但是, 下落或二第二十种正常钠含水物是充足使桃红色颜色可认识。
琼脂胶质属性被普通微生物的活动象那些明胶不毁坏被长式继续的热化在高温, 亦不。上述属性, 然而, 被影响和也许被琼脂被溶化液体的回应完全削弱。
液体的回应, 即, 是否它酸或碱性, 影响琼脂至于其可溶性、扎实、颜色、透明度、滤运领和相当数量condensa tion 水。如果琼脂被溶化在酸度的液体
琼脂39
等值对0.1% HC1, 琼脂非常欣然溶化, 快速过滤得, 总值滤出液是不变硬在冷却的一个light-yellow, 透明, 溜滑, 含水解决方法。如果与氢结合的氯的酸的更小的百分比被使用, 固体化发生(在40 C 以下。) 但果冻"不会站起来" 和是因此无用为琼脂偏锋或板材文化。很多精读densation 水并且是存在。
如果琼脂被溶化在微弱的碱性或中立汤, 慢慢地过滤和快速变硬在40 C., 对一非常坚实, 不透明的厚实, 红棕色, 黏性液体被获得, 烘干果冻, 有但少许结露水; 它保留其形状很好在偏锋和在板材里。因而琼脂的值作为一个坚实培养基被上升或降低根据强碱性或酸度cjegree 。
它必须是着名另外, 然而, 当琼脂变硬的属性被酸超额的出现一次毁坏在其解决方法, 这个属性可能由中立化从未收复与碱; 酸每manently 毁坏胶体的反演性。
琼脂melting-point (1.5% 在中立解决方法) 是97 C. 和虽然其变硬的点是在40 C., 何时一旦它变硬了它将站起来在温箱在温度50 C 。为细菌学目的, 唯一保留流动性在从38 到40 C. Agar 保留流动性只在一个温度在这点之上会是太热的当在一个可变的状态至于使用的那份琼脂的表单可能被使用; 有机体的生命力被介绍被高温会削弱或毁坏了。
困难遇到在一个坚实培养基的准备从琼脂, 由于其缓慢的可溶性、力cosity 和结果缓慢的滤运领。其解决方法(消化) 被影响, 依照被提及上面, 由长式热化在热水锅、蒸汽消毒器、autoclav, 或自由火焰。时间必需为完全消化取决于三件事: 回应
40 将军微生物学
琼脂被溶化的液体, 琼脂百分比目录, 和方法溶化。琼脂解决方法的回应的影响被对待了以上。至于常规文化使用, 然而, 普通琼脂被做+15 更加充分的缩放比例(琼脂变硬有困难在+30 之上更加充分的缩放比例) 。
百分之一琼脂更加容易地是可溶物在同等情况下比一更高的百分比。一和一半百分比是金额被使用在普通琼脂媒体, 给有些更加僵硬和因而更加中意的果冻。
琼脂最迅速地被消化在自由火焰。如果充足地没加热, 在琼脂的滤清和绝育以后由断断续续的方法, 一丛毛状precip itate 频繁地出现在早先清楚媒体。这可能由服从做消失在许多情况下对autoclav (120 C 的温度。15 Ibs.) 。
琼脂为培养基应该是整个地清楚当液体, 和同类地不透明透亮当固体; 它应该有translucence 充足允许深刻的殖民地在板材或刺中文化欣然被观察; 它不应该包含丛毛状物料, 沉积, 或棉花或滤纸张, 作为这些微生物的更加后面的典型的殖民地发展和, 对无经验, 也许某个时候弄错为殖民地。
在第一方法曾经被使用为做琼脂处理沉积被结算对底层的培养基, 而不是过滤热的琼脂通过滤纸、吸收剂棉花, 或石棉, 它让冷却, dur ing; 当固体沉积被切除了。这个方法不是中意的, 因为总值琼脂的清楚会取决于冷却的费率; 更慢冷却, 沉积作用更加完全地会发生。
琼脂不是食物为微生物总之, 即, 它由多数细菌消化酵素象明胶不影响, 。但是, 有液化琼脂的力量, 在之中是B 的几细菌知道。
营养琼脂41 的准备
gelaticus n. sp. (gran) 并且Bad. Nenckii, 其中之二找到, 和会被预计, 在海水里。琼脂的这种compara tive 惰性使它重要为准备, 坚实综合媒体, 值的也许是en hanced 由服从商业琼脂对自然发酵在哪个进程期间用能食物物质所有跟踪由微生物用完当前。(Beijerinck 。)
琼脂有用特殊在微生物耕种必须被举办在一个温度在明胶之上melting-point 的细菌学工作。这个功能使被采取了在医疗细菌学方面的了不起的大步成为可能, 许多致病性细菌可能被隔绝和增长只有困难在tempera tures 在那机体之下。
参考
史密斯, ERWIN F.: 细菌关于植物病。卷。I,
页31-36 。几个例证。SCHULTZ, N. K.: Zur Frage 冯der Bereitung einiger Nahrsubstrate 。
分。F. Bakt 。I. Orig., Bd 。10 日1891 年, p. 57 。
执行9 。营养琼脂的准备
用具。3.5 公升玛瑙商品桶; 15 gms 。琼脂; 10 gms 。胨; 5 gms 。盐; 10 gms 。蛋卵蛋白(或一个蛋); 500 c.c. 不育的肉注入; 500 c.c. 自来水; 滴定法用具; N/20 NaOH; N/l NaOH; 酚酞类(指示符); 蒸馏水; 大漏斗; 被打褶的滤纸; 装载的漏斗; 不育的试管; 不育的公升烧瓶; 粗糙的平衡; 大煤气喷燃器; 1 公升量杯; 用具为蒸汽绝育。
方法。1 。在一个3 公升玛瑙商品桶安排15 gms 。琼脂在500 c.c 。自来水。
2 。洗涤琼脂很好, 分离细片和squeez ing 它通过手。
3 。倾析肮脏的水, 评定金额倾吐
42
常规微生物学
; 用同样相当数量干净的自来水替换。
重复。
4 。溶化在自由火焰和煮沸五分钟, 经常搅动。solu tion 必须是整个地从琼脂解脱团。
5 。加1% Witte 的胨和0.5% 盐来煮沸的琼脂。
6 。对500 c.c 。肉在融合添加10 gms 。与100 c.c 很好被混合了的蛋al bumen 。自来水。(投入蛋卵蛋白在翻转者和加足够的水形成粘贴。搅动直到光滑和然后加保留ing 水。一个蛋; 井被摔打,
图9 。热水漏斗为也许被替代。) 混合所有过滤的琼脂或明胶。周到地
7 。慢慢地倾吐熔化琼脂混合物入肉注入, 经常搅动。热在autoclav 在120 C. 四十五分钟或一时数在流的蒸汽。
附注。时期为这热化也许被加长对好处, 但从未被变短。如果琼脂充足地未被加热在滤清之前, 丛毛状沉淀物将形成在管在加热在流的蒸汽。这也许由短时间加热在许多情况下造成消失在autoclav 在15 Ibs 。
8 。滴定与N/20 NaOH 。
9 。调整媒体的回应到+15 与正常NaOH 或正常HC1 。Retitrate 和重调回应如果需要。
10 。Counterpoise 和注意重量。
11 。煮沸十五分钟在自由火焰, 搅动stantly 精读,
DUNHAM 的胨解决方法43
12 。均衡和组成任一损失在重量与煮沸的蒸馏水。
13 。过滤煮沸的热的通过被打褶的滤纸早先被洗涤与开水。通过滤出液通过同样纸直到清楚。
14 。装载60 到70 不育的试管, 使用大约8 c.c 。媒体为各支管。
15 。加热在流的蒸汽二十分钟在三个suc cessive 日。
16 。在最终热化的末端, 安置琼脂管在一个倾斜的位置变硬(不要允许媒体接触插件) 以便大表面是前sented 为微生物的耕种。这些叫做琼脂偏锋。
附注。如果琼脂管将被使用只为琼脂偏锋, 无足轻重媒体必要在管比当他们将被使用为镀层。
17 。消炎一个大烧瓶琼脂, 热三十分钟在四个连续日。
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