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自动化的Edman 退化

氨基酸顺序可能由自动化的Edman 退化确定

氨基酸结构的肽是坚定的。  肽被水解入其构成氨基酸由加热它在6 N HCl 在110.C 24 时数。  斯坦福Moore 和威廉斯坦表示, 氨基酸在水解物里可能由ionexchange 色谱法分离在列sulfonated 多苯乙烯和由起反应定量他们与茚三酮。 

氨基酸对待了这方式授予一个强烈的蓝色颜色, 除了果仁糖, 给一个黄色颜色因为它包含一个附属氨基组。  氨基酸的浓度在解决方法与解决方法的光学absorbance 是按比例在热化以后它与茚三酮。  这个技术可能检测一微克(10nmol) 氨基酸, 是关于金额当前在thumbprint 。 

作为一点象nanogram (10 pmol) 氨基酸可能被检测通过fluorescamine, 起反应以一个高萤光产品的氨基组。  氨基酸的身分由其elution 数量显露, 在缓冲的数量过去经常从列取消氨基酸。 

蛋白质或肽的氨基终端残滓可能由标记辨认它与形成一个稳定共价连结的化合物。 

Fluorodinitrobenzene (FDNB) 第一次被使用了为这个目的由Frederick Sanger 。  Dabsyl 氯化物现在常用因为它形成可能被检测以高敏感性强烈地的色的衍生商品。  它起反应以一个uncharged a-NH2 组形成是稳定在情况下水解肽债券的磺胺衍生商品。 

虽然dabsyl 方法为确定氨基终端残滓是敏感和强有力的, 它无法一再被使用在同样肽因为肽完全被贬低在酸加水分解步骤。  Pehr Edman 构想了一个方法为标记氨基终端残滓和劈开它从肽没有打乱肽债券在其它氨基酸残滓之间。  Edman 退化从肽的氨基末端连续取消一残滓一次。  Phenyl isothiocyanate 起反应以肽的uncharged 终端氨基组形成phenylthiocarbamoyl 衍生商品。  然后, 在mildy 酸性情况下, 终端氨基酸的一件循环衍生商品被解放, 留下原封肽由一氨基酸变短。

对蛋白质结构的分析被sequenators 的发展明显加速了, 是为氨基酸顺序的确定的自动化的票据。  在一液体阶段的sequenator, 蛋白质薄膜在一个转动的圆柱形杯子被服从对Edman 退化。  试剂和提取溶剂通过在蛋白质被固定的影片, 并且被发行的PTH 氨基酸由高压液相色谱辨认(并且叫做高性能液相色谱, HPLC) 。 

Edman 退化的一个循环被执行在少于二时数。  由被重复的退化, 大约五十残滓氨基酸顺序在蛋白质可能是坚定的。  Gas-phase sequenators 可能分析肽和蛋白质的picomole 数量。  这种高敏感性使它可行分析蛋白质范例的顺序被洗脱从SDS 聚丙烯酰胺胶凝体的一个唯一范围。