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分子生物学- 科学报价

最卓越的发现由科学家做是科学。~Gerard Piel

虾碱性磷酸盐或树汁, 是摧化5 磷酸盐dephosphorylation 从’ 核酸dephosphorylating 的核糖核酸或DNA 末端的酵素。

注意PCR 产品和底漆并且没有磷酸酶在他们的自由末端, 并且需要因此是磷酸化的在克隆之前如果您使用de 磷酸化的传染媒介!

树汁是温度不稳定是因此您可能容易地停用这酵素(与CIP 比较!) 。树汁被停用以65.C 热水锅孵出15 分钟。

您不得到实际上回应。树汁要求至少10mM 氯化镁(但虾碱性磷酸盐的优选的酶活性是在20-25mM 氯化镁) 并且这有效很好在酸碱度8.0 。

对DNA 末端(2.5 ug dephosphorylate 1 pmol 3 Kb 质粒), 为了1hr 在您需要的37.C:

树汁0.1 部件为5' 突出物, 0.2 部件为直言和0.5 部件为3' 垂悬。
酵素来1 个部件每ul, 因而是安全的您可能使用approx.0.5 部件为2 ug 。

要诀: 树汁酵素可能被添加直接地来限制文摘! 因而整体行动包括限制酵素消化、dephosphorylation 、酵素钝化作用, 结扎术或5’ 结束标记可能执行在一支唯一管里由添加适当的试剂。这将允许您节省时间和是高效率的!

讨论和过帐问题对此在虾碱性磷酸盐和 DNA 克隆论坛 !

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