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Agarose 洗净DNA 片段

版权2007 分子岗位

DNA 片段洗净从Agarose 协议

1. 运行DNA 在"低融解" agarose 胶凝体。
2. 为600bp DNA 片段对5kb use1%; 为300- 700bp 用途2% agarose 。如果您需要运行更小的片段使用2% "Nusieve" + 1% "低熔化" 。
3. 在范围分离了之后, 形象化范围在一个紫外配件箱(使DNA 减到最小暴露对紫外)
4. 剪切范围(不要抓紫外补白在轻的配件箱!) 。
5. 添加T.E. 缓冲(10mM Tris-HCl 100 ul 酸碱度7.6, 1mM EDTA) 来范围, 易碎, 热对65.oC 为大约。5 分钟, 添加酚, 漩涡, 热200l 65.C 3 min., 漩涡。
6. Microfuge 5 分钟, 去除supernant
7. 添加100 升T.E. 来酚, 漩涡, 热65.C 3 min. 漩涡
8. Microfuge, 水池supernants 。
9. 三氯甲烷解压缩(大约400 ul), microfuge 3 分钟。
10. EtOH 沉淀物, 添加1/10 卷3M Na0Ac, 2.5 卷。EtOH 。
11. -20.C 1-2+hrs; 旋转30 min., 烘干下来, 带来适当的卷0.1X T.E 。

要诀为DNA Agarose 胶凝体洗净

• 设置trans 反光板对长式紫外波长(或低功率) 。这是一个巨大方式使时间紫外DNA 风险和能量减到最小。这使DNA 的紫外mutagenesis 减到最小。
• 修剪一样agarose 从范围尽可能没有取消DNA 。这帮助在将提高DNA 洗净的使减到最小的agarose 污秽。
• 如果您得到问题用途商业工具箱譬如转动columns.There 是一些优秀工具箱为提取DNA 如果您能付得起他们。这些包括工具箱从Qiagen 、斯格码, 和其它公司。

相关条款为DNA 洗净