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分子生物学- 科学报价
科学是这生成傻瓜能去在点之外由最后生成的天才到达的任一个学科。~Max Gluckman 、Politics 、Law 和Ritual 1965 年
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细菌Genomic DNA 隔离协议
Genomic DNA 隔离从Bateria 协议
准备方法为geneomic DNA 的隔离从细菌使用triton 洗净
- 生长几殖民地- 大称15ml 文化。
- 收获电池入一支唯一eppendorf 管或一支15 机器语言一次性的管根据数量。
- 重新悬挂药丸以300ul STET 缓冲(900ul) 。
- 在重新悬挂以后添加30ul RNase/lysozyme 混合物(100ul) 。
- 煮沸药丸为1 分钟15 秒(一分钟45 秒) 。
- 转动在microfuge 15 分钟。
- 采取上层清液和酚解压缩与150ul (500ul) STET- 饱和的酚。
- 转动和采取上层清液。添加1/10 数量4M 锂氯化物(被真空加热) 。让坐在冰5-10 分钟。
- 转动和采取上层清液。添加相等的数量异丙醇。RT 5 分钟。
- 旋转。药丸不会可视。不恐慌, DNA 一直被困住对边管。
- 重要: 洗涤与80% 对氨基苯甲酸二(95% 将导致残余Triton 沉淀)
- 重新悬挂药丸在50-200ul 。
- 溶菌酶核糖核酸酶混合物10mg/ml 溶菌酶1mg/ml 核糖核酸酶(用途便宜的成绩(BMB) 而不是核糖核酸酶A, 是太昂贵的) 50mM Tris-HCl pH8.0 存储在-20oC 在小整除数。不要重新冷冻在解冻以后。
- STET 8% 蔗糖5% Triton X-100 50mM Tris-HCl (pH8.0) 50mM EDTA 酸碱度8.0 补白消炎。存储在4.oC