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原生质体隔离协议

原生质体隔离协议

新陈代谢能干原生质体的准备

Saji Menon 和Vibha Tyagi
科学研究, 雕像圈子, 斋浦尔(拉贾斯坦), 印度Birla 学院

材料被要求为原生质体隔离

70% 对氨基苯甲酸二
0.1% 汞氯化物
0.5M 甘露醇

酵素解决方法:
1% 纤维素酶0.25% Macerozyme R-10
27.2 mg/l 磷酸二氢钾
101 mg/l KNO3
1480 mg/l CaCl2.2H2.O
246 mg/l MgSO4.7H2.O
0.5M 甘露醇(酸碱度5.6)

电池原生质体洗涤的媒体:
0.5M 甘露醇(酸碱度5.6)
27.2 mg/l 磷酸二氢钾
101 mg/l KNO3
1480 mg/l CaCl2.2H2.O
246 mg/l MgSO4.7H2.O

被修改的原生质体培养基

(表下面是列出的)

协议为新陈代谢能干原生质体的准备

作为新鲜的叶子从4-5 个星期老无菌增长的工厂。
表面消炎在70% 对氨基苯甲酸二里被对待跟随与0.1% 汞氯化物为1 分钟。
周到地洗涤叶子与不育的蒸馏水。
剥叶子组织的更低的表皮和安置它在0.5M 甘露醇解决方法一个小时在petriplate 。
去除甘露醇解决方法和用被过滤消毒的酵素解决方法替换它。
孵化板材在黑暗16-20 时数在25.oC 。
分离原生质体层由滤清使用0.45.M 尼龙膜。
分离滤出液在1000g 10 分钟在4 oC 。
去除上层清液和重新悬挂药丸在电池原生质体洗涤的媒体。
分离在1000g 10 分钟。
重复步骤9 两次。
暂停最后原生质体药丸在密度1*105 ml/l 在被修改的原生质体培养基。
作为优良薄层镀原生质体在petriplates 。
孵化板材在25 oC 在黑暗。

被修改的原生质体培养基

S.No 。	组成部分	金额
A	矿物盐
1	硝酸铵	82.5 gm/l
2	钾硝酸盐	95.0 gm/l
3	硼酸	1190 mg/l
4	钾Dihydrogen 磷酸盐	34 mg/l
5	钾碘化物	166 mg/l
6	钠钼酸盐	250 mg/l
7	钴氯化物二水合物	25.0 mg/l
8	氯化钙二水合物	88.0 gm/l
9	镁Sulphate Heptahydrate	74.0 gm/l
10	锰Sulphate 四水化合物	4460 mg/l
11	锌Sulphate Heptahydrate	1720 mg/l
12	铜Sulphate 五水合物	25.0 mg/l
13	乙烯Diamino 四乙酸Disodium 盐	7.45 gm/l
14	硫酸亚铁heptahydrate	5.57 gm/l
B	糖
1	葡萄糖	30.0 gm/l
2	核糖	0.5 gm/l
3	甘露糖	0.5 gm/l
4	山梨糖醇	0.5 gm/l
C	有机酸
1	钠丙酮酸盐	5.0 mg/l
2	柠檬酸	10.0 mg/l
3	苹果酸	10.0 mg/l
D	维生素
1	硫胺氯化物	100 mg/l
2	Nicotinamide	500 mg/l
3	吡哚素氯化物	500 mg/l
4	钙泛酸盐	250 mg/l
5	生物素	100 mg/l
6	抗坏血酸	75.0 mg/l
7	核黄素	50.0 mg/l
8	肌醇	100 gm/l
E	激素
1	2,4 Dichloro 含苯氧基的乙酸(2,4-D)	0.5 mg/l
2	苯基氨基嘌呤(BAP)	1.0 mg/l

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