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Agarose 胶凝体电泳法是使用的方法在生化和分子生物学分离 DNA, 或 核糖核酸 分子由范围然而蛋白质可能并且被分离在agarose 胶凝体。分子的分离由移动达到negatively-charged 核酸分子通过一个agarose 矩阵在一个电场(参见 电泳法) 。更短的分子快速地行动和比长期进一步移居一个。
Agarose 胶凝体电泳法主要被使用在DNA 和核糖核酸分子的分析或分离(虽然蛋白质可能并且被分离在agarose 胶凝体), 然而分离并且允许DNAs 的特定范围的洗净在限制酵素消化以后。这通常被使用在克隆获得剪切质粒, agarose 胶凝体电泳法分离剪切传染媒介从未割减那些。
因而agarose 胶凝体准许:
好处是, 胶凝体容易地倾吐, 不弈质范例。范例可能并且被收回。
不利是, 胶凝体可能熔化在电泳法期间, 缓冲可能成为用尽, 并且基因的不同的表单也许运行以变化莫测的形式。
最重要的系数是DNA 分子的长度, 更小的分子旅行。但DNA 分子的相应一致并且是系数。避免这个问题线性分子通常被分离, 通常DNA 片段从限制文摘, 线性DNA PCR 产品, 或RNAs 。
增加胶凝体的agarose 浓度减少迁移速度和启用更小的DNA 分子的分离。更高电压, DNA 快速地移居。但电压由情况限制它加热和最后导致胶凝体熔化。高电压并且减少解决方法(在大约5 到8 V/cm).[citation 之上需要]
用限制酵素未被剪切DNA 质粒的相应一致将行动用不同的速度(最慢对快速地): 刻痕或打开通报, linearised, 或supercoiled 质粒。
Agarose 胶凝体可能被使用为DNA 片段的分离范围从50 基本的成对 对几megabases (百万基础) 由电泳法。通常然而, agarose 胶凝体电泳法使用分离DNA 从PCR 并且克隆在100bp 的范围对大约15kb. 运行时间是大约30 分钟- 1 时数久。
小DNAs 或RNAs (小比100bp) 由聚丙烯酰胺胶凝体更好分离, 然而2-3% 个agarose 胶凝体也许是充分的分离均匀50bp 片段从更大的核酸。
最近然而, 它被显示, 一基本的成对范围差额能是解决在一个3% agarose 胶凝体以一个极端低传导性媒体譬如1 毫米锂硼酸盐(Brody JR, Calhoun ES, Gallmeier E, Creavalle TD, 克恩SE (2004) 。DNA 和核糖核酸Ultra-fast 高分辨率agarose 电泳法使用低molarity 导电性媒体。Biotechniques 。37:598-602.) 。
如同您能看低百分比agarose 胶凝体是最佳为大DNA 分子的分离, 但是高百分比胶凝体是最佳为更小的DNAs 。
依照被提及前面, agarose 胶凝体电泳法允许分离和因而DNA 的洗净为克隆。但是, 这通常要求高纯度低融解agarose 如果DNA 将从胶凝体被提取。
根据DNA 的范围electrophoresed 并且申请, 不同的缓冲可能被使用为agarose 电泳法。 TAE 缓冲 (或Tris 醋酸盐EDTA) 是最公用的被使用的agarose 胶凝体电泳法缓冲。TAE 有缓冲的最低的缓冲能力, 然而TAE 提供最佳的解决方法为更大的DNA 。但是, TAE 需要低压和更多时间。
但是 TBE 缓冲 (Tris/Borate/EDTA) 经常被使用为更小的DNA 片段(ie 较少比500bp) 。
钠硼酸盐或 SB 缓冲 是新建缓冲, 然而它是无效的为解决的片段主要比5 kb 。但是SB 有好处在其低传导性, 允许更高的电压(35 V/cm) 。这能允许更短的分析时间为定期电泳法。
| 线程数 | |||
| 线程数称谓/海报 | 前笔过帐 | 回复 | 视图 |
| 03-07-2008 上午12:13 | 0 | 633 | |
| 06-01-2008 下午05:47
由
ksuresh345 " | 1 | 461 | |
| 02-26-2007 上午08:52 | 3 | 726 | |
| 11-06-2007 下午12:36
由
dnamolecule " | 0 | 489 | |
| 11-13-2006 下午09:30 | 2 | 460 | |
| 11-05-2007 下午03:18
由
kmunson779 " | 2 | 309 | |
| 07-04-2006 下午04:59 | 0 | 806 | |
| 08-24-2006 下午06:19 | 6 | 1095 年 | |
| 03-18-2007 下午05:30 | 2 | 233 | |
| 03-16-2008 上午02:00 | 2 | 385 | |
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Agarose 胶凝体装载范例
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