Welcome to Molecular Station! Välkommen till Molekylär Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du måste registrera dig innan du kan posta i vårt forum eller använda vår avancerade funktioner. Register Now! Registrera dig nu! Its Free and Fast! Dess fria och Snabbt!

Already registered? Redan registrerad? Login now below. Logga in nu nedan.

User Name: Användarnamn:

Password: Lösenord:

Remember Me? Kom ihåg mig?

Already registered and Forgot your password? Redan registrerad och Har du glömt ditt lösenord? Click below to recover it. Klicka nedan för att återkräva det.

Recover Lost Password Återskapa förlorat lösenord

Join now - it's fast and free! Gå med nu - det är snabbt och gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molecular Station är den största nätverk av forskare, vetenskapsmän och vetenskap älskare var som helst!

Recent Forum Posts Recent Forum Posts

Western Blot Western Blot

Western Blot Protocols Western Blot protokoll

Western Blot Forum Western Blot Forum

Western Blot Products Western Blot Produkter

Western Blot Books Western Blot Böcker

Western Blot Troubleshooting Western Blot Felsökning

Western Blot Books Western Blot Böcker

See also: Related Links to External Sites: Western Blot Se även: Länkar till externa webbplatser: Western Blot

Western Blot Western Blot

AUDIO : Listen to a detailed Western Blot Explanation ! Courtesy: National Human Genome Research Institute. Ljud: Lyssna på en detaljerad Western Blot Förklaring! Courtesy: National Human Genome Research Institute.

Western Blot Definition: Western blotting is a technique used to identify and locate proteins based on their ability to bind to specific antibodies. Western Blot Definition: Western blotting är en teknik som används för att identifiera och lokalisera proteiner utifrån deras förmåga att binda till specifika antikroppar.

Western blot analysis can detect your protein of interest from a mixture of a great number of proteins.  Western blotting can give you information about the size of your protein (with comparison to a size marker or ladder in kDa), and also give you information on protein expression (with comparison to a control such as untreated sample or another cell type or tissue). Western blot analys kan upptäcka ditt protein av intresse från en blandning av ett stort antal proteiner. Western blotting kan ge dig information om storlek på protein (med jämförelse till en storlek markör eller stege i kDa), och det ger även information om protein expression (med jämförelse med en kontrollgrupp som obehandlat prov eller annan celltyp eller vävnad).

Summary: Western Blot Gives You Information on the: Sammanfattning: Western Blot ger dig information om:

Western blot analysis can analyze any protein sample whether from cells or tissues, but also can analyze recombinant proteins synthesized in vitro. Western blot is dependent on the quality of antibody you use to probe for your protein of interest, and how specific it is for this protein. Antibodies are now easily obtainable from commercial sources, and you can purchase one for your protein of interest. Western blot analys kan analysera varje protein prov om från celler eller vävnader, utan också kan analysera rekombinanta proteiner syntetiseras in vitro. Western blot är beroende av kvaliteten på antikropp som du använder för att sonden för ditt protein av intresse, och hur specifika är det för denna protein. Antikroppar kan nu enkelt kan erhållas från kommersiella källor, och du kan köpa en för ditt protein av intresse. If your protein is a novel protein, you must produce an antibody yourself or get a company to do it for you. Om ditt protein är ett nytt protein måste du lämna in en antikropp dig själv eller få ett företag att göra det åt dig. In this case you will need at least a small amount of your protein either purified from cell extracts or made as a recombinant (ie in vitro or in a recombinant protein expression system ). Antibodies specific to your protein are vital to western blotting as they are able to bind specifically to your protein of interest instead of the thousands of proteins on your western blot! I detta fall behöver du åtminstone en liten del av ditt protein antingen renas från cellen utvinner eller göras som en rekombinant (dvs. in vitro eller i ett rekombinant protein expression system). Antikroppar specifika för ditt protein är avgörande för Western blotting som de är kan binda specifikt till din protein av intresse i stället för de tusentals proteiner på din western blot!

Figure 1. Figur 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot. Uppgifter om de åtgärder som krävs för att erhålla protein för Western blot.

Figure 2. Figur 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot. Figur detalj beskriver de åtgärder för att bedriva en Western blot.

[ Top ] [Top]

How Does Western Blotting Work? Hur fungerar Western blotting Work?

See Diagram 1 below. Se diagram 1 nedan. First things first. Första saker först. Obtain a protein sample you want to analyze, such as cell samples. Skaffa ett protein prov du vill analysera, t.ex. cell prov. Lyse the cells to release protein contents. Lyse cellerna att frigöra protein innehåll. Run these on a gel which separates proteins on the basis of size. Kör dessa i en gel som skiljer proteiner på grundval av storleken. Then transfer these gel proteins onto a membrane using electricity. Därefter överförs dessa gel proteiner på ett membran med hjälp av elektricitet. This membrane can then be used to probe for proteins of interest using a primary antibody. Detta membran kan sedan användas till sonden för proteiner av intresse att använda en primär antikropp.

What You Need to Western Blot: Vad du behöver Western Blot:

Western blot relies on the primary antibody to detect this protein from the thousands of proteins on your membrane and previously on your gel! Western blot är beroende av primära antikroppen att upptäcka detta protein från de tusentals proteiner på membran och tidigare på din gel! (a cell can contain 30,000 different proteins - and these same proteins can even be altered giving you over 300,000 different proteins!). (en cell kan innehålla 30000 olika proteiner - och samma protein kan även komma att ändras vilket ger dig mer än 300000 olika proteiner!). Using an antibody recognizes your primary antibody (a secondary antibody) you build up a protein-antibody-antibody sandwich!  The secondary antibody has a horse radish peroxidase enzyme which converts a luminol substrate to a light releasing substance! Använda en antikropp känner igen din primära antikroppar (en sekundär antikropp) du bygga upp ett protein-antikropp-antikropp smörgås! Den sekundära antikroppen har en häst rättika peroxidase enzym som omvandlar en luminol substrat till en lätt släppa ämnet! This light is detected as a spot on film. Detta ljus detekteras som en plats på film. From this spot you can determine how much protein is there relative to other spots, or the size of the protein relative to a size marker that is run also on the gel. Från denna plats kan du avgöra hur mycket protein är det i förhållande till andra platser, eller storleken av det protein i förhållande till en storlek markör som körs också på gelen.

Diagram 2 shows a western blot example gel. Diagram 2 visar en Western Blot exempel gel. Lane 1 is a protein size marker ladder which shows different known sizes of proteins, this can be purchased commercially and the sizes of all the spots are given in a pamphlet. Bana 1 är ett protein storlek markör stege som visar olika kända storlekar av proteiner, detta kan köpas kommersiellt och storlekar på alla platser finns i en broschyr. Lane 3 is a cancer sample and lane 5 is a normal sample. Bana 3 är en cancer provet och lane 5 är ett normalt prov. As you can see the protein in lane 3 has a higher expression than the cancer sample in lane 5, which is interesting. Som du kan se det protein i kö 3 har en större yttrandefrihet än cancer provet i lane 5, vilket är intressant. Also, the protein spots in lanes 3 and 5 are the same size as the 2nd spot in the size ladder from lane 1. Dessutom, det protein spots i körfält 3 och 5 i samma storlek som den 2: a plats i storlek stege från lane 1. We can then look at the known protein size from our brochure which we received with the ladder. Sedan kan vi titta på de kända protein storlek från vår broschyr som vi fick med stege. We then determine that the size of the protein is 80 kDa. Vi måste då bestämma att storleken av det protein är 80 kDa. Our protein of interest is also 80 kDa. Vårt protein av intresse är också 80 kDa. So we know that the western blot worked and that the protein is highly expressed in a cancer sample! Så vi vet att Western Blot arbetade och att proteinet är mycket uttrycks i en cancer prov!

To Detect your Protein: Att upptäcka din Protein:

[ Top ] [Top]

Diagram 1. Diagram 2. Diagram 1. Diagram 2.

Now Learn everything else there is about western blots! Nu Läs allt annat finns det cirka western blotting!

[ Top ] [Top]

Table of Contents , in order done for western blot: Innehåll, så gjort i Western Blot:

Steps in Western Blotting : Åtgärder i Western blotting:

- Preparing for Western Blot -- Att förbereda Western Blot

- Which Antibody to use for Western Blots -- Vilka Antibody att använda för Western blotting

- Lysing Cells for Western Blot -- Lysing celler för Western Blot

- SDS-PAGE Gel Information -- SDS-PAGE gel Information

- SDS-PAGE Gel Preparation for Western Blots -- SDS-PAGE gel Förberedelse för Western blotting

- Gel Electrophoresis - running the gel -- Gelelektrofores - kör gel

- Tranfer of Proteins to Membrane for Western Blotting -- Överföring av protein Membrane för Western blotting

- Western Blot -- Western Blot

Terms and Definitions used in Western Blot Analysis Termer och definitioner som används i Western Blot Analysis

Latest Western Blot Topics ! Senast Western Blot Topics!

[ Top ] [Top]

Steps in Western Blot Analysis: Åtgärder i Western Blot Analys:

- Sample Prepartation -- Sample Prepartation

- Lysing Buffer -- Lyseringsbuffert

- Antibody -- Antibody

- Lysing Cells -- Lysing Celler

- Gel Preparation -- Gel Förberedelser

- Running Gel -- Running Gel

- Transfer of Gel -- Överföring av Gel

- Controls -- Kontroller

- Western Blot -- Western Blot

- Readout -- Readout

- Analysis and Interpretation -- Analys och tolkning

[ Top ] [Top]

To Prepare Samples for Western Blot: Att förbereda Prover för Western Blot:

Whether you have Non-adherent Cells (such as T-cell lines or peripheral blood cells) or Adherent cells (such as Fibroblast cells or COS cells), you need to remove extraneous proteins from the media. Oavsett om du har icke-häftande celler (t.ex. T-cell-linjer eller perifera blodkroppar) eller vidhäftande celler (t.ex. Fibroblast celler eller COS celler), måste du ta bort främmande proteiner från media. For non-adherent cells you can gently pellet them with centrifugation and then wash the pellet with PBS. För icke-häftande celler kan du försiktigt pellet dem med centrifugering och sedan tvätta pelleten med PBS. For adherent cells, simple wash the flask or dish with PBS prior to western blot. För vidhäftande cellerna, enkelt tvätta kolven eller skålen med PBS före Western blot.

Western blot analysis examines proteins, and so we want the proteins to be release from the cells and also prevent the proteins from being cut up by proteases. Western blot analys undersöker proteiner, och så vi vill att de proteiner som skall släppa från cellerna och även förhindra att proteiner från att styckas upp av proteaser. We need these to western blot: Vi behöver dessa till Western Blot:

- to keep things cold! -- Att föra saker kallt! 4C on ice during cell lysis for western blotting 4C på is under cell-lys för Western blotting

- use Detergent to break up membranes of cells to release proteins -- Använda diskmedel för att bryta upp membran i celler att släppa proteiner

- Buffer -- Buffert

- Inhibitors (both protease inhibitors and phosphatase inhibitors if we will do western blot for phospho-proteins) -- Hämmare (både proteashämmare och phosphatase inhibitors om vi kommer att göra western blot för phospho-proteiner)

Detergent - Lysing Cells For Western Blot Detergent - Lysing celler för Western Blot

SDS and RIPA are detergents that are used to solubilize proteins for later analysis using western blotting. SDS och RIPA är rengöringsmedel som används för att solubilize proteiner för senare analys med hjälp av Western blotting. This is required as many proteins are either inside the cell or located inside cell membranes, so we need to release these proteins to be able to immunoblot for them. Detta är nödvändigt eftersom många proteiner är antingen inne i cellen eller belägen inom cellmembranen, så vi måste släppa dessa proteiner för att kunna immunoblot för dem.

[ Top ] [Top]

Which Antibody should I use for Western Blotting? Vilka Antibody ska jag använda för Western blotting?

You should select an Antibody to use for Western Blot. Usually either mouse monoclonal antibodies or rabbit polyclonal antibodies are used. Du bör välja en antikropp som ska användas för Western Blot. Vanligtvis antingen mus monoklonala antikroppar eller kanin polyklonala antikroppar används.

You can use either an antibody without any added groups, or use an antibody which is conjugated to biotin. Du kan använda antingen en antikropp utan tillsatta grupper, eller använda en antikropp som är konjugerad till biotin. These antibodies do not require Dessa antikroppar inte kräver

Polyclonal vs Monoclonal Antibodies for Western Blot Polyklonala vs monoklonala antikroppar för Western Blot

Monoclonal Antibodies are usually better for Western Blotting due to: Monoklonala antikroppar är oftast bättre för Western blotting på grund av att:

- better signal to noise ratio ( lower background in western blot ) -- Bättre signal / brusförhållande (lägre bakgrund i Western blot)

- their higher specificity ( you get less contaminating proteins or Ig ) -- Deras högre specificitet (du får mindre förorenande proteiner eller IG)

- overall cleaner results on the western blotting film (less non-specific bands detected) -- Övergripande renare resultat på Western blotting film (mindre icke-specifika band upptäckts)

Polyclonal Antibodies are better suited for Immunoprecipitation: Polyklonala antikroppar är bättre lämpade för Immunoprecipitation:

- they recognize more epitopes -- De känner igen flera epitoper

- have higher avidity -- Har högre aviditet

[ Top ] [Top]

Lysing Cells for Western Blot: Lysing celler för Western Blot:

TIPS before you lyse for western blotting: TIPS innan du lyse för Western blotting:

If you are going to western blot for protein mass (ie a protein that is not phosphorylated): Om du ska Western blot för protein massa (dvs ett protein som inte är phosphorylated):

- you can lyse in larger volumes (keeping the rest to blot for other proteins) -- Du kan lyse i större volymer (som håller resten till blot för andra proteiner)

If you are going to western blot a phospho-protein (or phosphorylated protein) it is important to do the following: Om du ska Western blot en phospho-protein (eller phosphorylated protein) är det viktigt att göra följande:

- make sure you use phosphatase inhibitors ( such as vanadate because phosphatases will remove the phosphates from your proteins! ) -- Se till att du använder fosfatas hämmare (t.ex. vanadate eftersom phosphatases kommer att ta bort fosfater från din proteiner!)

- also lyse cells in the smallest volume possible ( ie lyse in 100 ul loading buffer, this is done because you can load most of the cells you lysed. This is important as signal is quite weak when western blotting for phospho-proteins.) -- Också lyse celler i den minsta volymen möjligt (dvs. lyse på 100 ul buffert, detta görs eftersom du kan ladda de flesta av de celler du lyserat. Detta är viktigt eftersom signalen är ganska svag när western blotting för phospho-proteiner.)

If you are looking at protein-protein interactions : Om du tittar på protein-protein interactions:

- do not use SDS as it dissociates protein-protein interactions and thus proteins are denatured (especially after boiling) -- Använd inte SDS eftersom det dissociates protein-protein interaktioner och därmed proteiner denatureras (särskilt efter kokning)

- for western blotting protein-protein interactions, ie native interactions you must use a less-stringent detergent such RIPA. -- För Western blotting protein-protein interaktioner, dvs infödda interaktioner du måste använda en mindre stränga tvättmedel sådana RIPA.

Lysing: Lysing:

- can be done directly on the plate or dish -- Kan göras direkt på tallrik eller fat

- pellet the cells -- Pellet cellerna

- Keep on Ice and cold - use an ice bucket -- Det på is och kyla - använd en glass skopa

- Rule of thumb for how much lysis buffer to use is: 10^5 cells / uL of lysis buffer -- Tumregel för hur mycket lyseringsbuffert att använda är: 10 ^ 5 celler / ul av lyseringsbuffert

- collect in eppendorf tubes and label ( keep these on ice ) -- Samla på Eppendorf-rör och etikett (hålla dessa på is)

Measure total protein before Western Blot Analysis: Mät totala protein före Western Blot Analys:

- this allows more quantitative analysis if you want to compare treatment conditions in western blot analysis -- Därigenom kan en mer kvantitativ analys om du vill jämföra behandling villkor i Western blot analys

- commercial kits are available such as a Bradford assay for measuring total protein (from Bio-Rad) -- Kommersiella kit finns tillgängliga såsom en Bradford-analysen för mätning av totalt protein (från Bio-Rad)

- 0.1% of SDS or greater can interfere with protein measurement -- 0,1% av SDS eller högre kan störa protein mätning

Denature Protein Samples : Denaturera Protein Prover:

- add protein loading sample buffer to an aliquot of cell lysate - contains dye (too see the migration on a gel, 2% SDS) -- Lägga protein lastning prov buffert till en del av cell lysate - innehåller färgämnet (alltför se migration i en gel, 2% SDS)

- add disulfide reducing agent such as beta - mercaptoethanol -- Lägga disulfide reduktionsmedel såsom beta - merkaptoetanol

- Boil in water bath or heating block (lower temperatures such as mid - 90 degrees decrease protein aggregation ). -- Koka i vattenbad eller värmeblocket (lägre temperaturer, t.ex. mitten - 90 grader minskning protein aggregation).

- Poke a hole in cap of each tube to prevent popping -- Peta ett hål i locket av varje röret för att förhindra popping

SDS-PAGE Gel Information for Western Blotting SDS-PAGE gel Information för Western blotting

SDS-PAGE Gels are gel matrices which are used to separate proteins by size in the presence of electric current. SDS-PAGE gel är gel matriser som används för att separera proteiner efter storlek i närvaro av elektrisk ström. Low percentage gels separate larger proteins whereas higher percentage gels separate smaller proteins better. Låg andel geler separata större proteiner medan högre procentsats geler särskilda mindre proteiner bättre. The problem is that all proteins have a charged associated with them, and in an electrical current this could cause problems. Problemet är att alla proteiner har en laddad associerade med dem, och på elström detta skulle kunna orsaka problem. This is solved by the addition of SDS to the protein samples. Detta kan lösas genom tillägg av SDS att proteinet prover. SDS binds to proteins every few amino acids and neutralizes the charge differences that proteins have. SDS binder till proteiner med några aminosyror och neutraliserar den avgift skillnader som proteiner har. This allows proteins to be separated by size and not by charge. Det gör att proteiner som skall separeras efter storlek och inte av avgiften.

[ Top ] [Top]

SDS-PAGE Gel Preparation for Western Blot SDS-PAGE gel Förberedelse för Western Blot

- depending on how much protein you will want to load for western blotting, you should use small combs or larger combs. -- Beroende på hur mycket protein du vill ladda för western blotting, ska du använda små kammar eller större kammar.

- the percentage of acrylamide is important. -- Andelen akrylamid är viktigt. Usually 10% acrylamide is used. Vanligtvis 10% akrylamid används.

- A resolving gel is used at the bottom with a pH of 8.8 -- En lösning gel används i botten med ett pH på 8,8

- A stacking gel (4-5%) pH 6.8 is used to pack proteins in together after loading -- En stapling gel (4-5%) pH 6,8 används för att packa proteiner i tillsammans efter lastning

- Polymerization of gels is increased by the catalysts APS and TEMED which speed up the polymerization reaction (formation and solidification) of the poly-acrylamide gel. -- Polymerisering av geler har ökat med katalysatorer APS och TEMED som påskynda polymerisation reaktion (bildning och stelning) av poly-akrylamid gelen.

- Load every Sample carefully and slowly to prevent sample leaking out of the lane. -- Load varje prov noggrant och långsamt för att undvika prov läcker ut i körfältet.

- Load every lane and use sample buffer in each (to prevent differences in ). -- Load varje körfält och använda provet buffert i varje (för att förhindra skillnader i).

[ Top ] [Top]

Gel Electrophoresis Gelelektrofores

1. Centrifuge samples for 10 sec after boiling. Centrifugera prover för 10 sek efter kokning.
2. Load sample into each lane Load prov i varje lane
3. Load MW reference Load MW hänvisning
4. Run gel at 100V (constant voltage) or even better at 40 mA (constant current). Kör gelen vid 100 V (konstant spänning) eller ännu bättre på 40 mA (konstant ström). Watch protein marker/ladder or dye front for when to stop gel. Titta protein markör / stege eller dye framsida för då slutar gel. Constant current gives better and sharper results if you have the time. Konstant ström ger bättre och skarpare resultat om du har tid.

- watch for bubbles between glass and under the gel - this means that it is working -- Titta på bubblor mellan glas och under gel - detta innebär att man arbetar

- watch for protein migration (should be going down) - if not you have switched the leads and can lose all your samples! -- Titta på protein migration (bör gå ned) - om inte du har bytt den leder och kan förlora alla dina prover!

- Initially run slowly through the stacking gel (~ 50 Volts), this gives sharper bands. -- Först kör långsamt genom stapling gel (~ 50 volt), detta ger skarpare banden.

- Do not run overnight -- Kör inte över en natt

- Do not over-heat the gel (this causes the gel to lose rigidity, leading to poor resoloving and blurry badly formed bands) -- Ta inte över-värme gelen (detta orsakar gelen att förlora styvhet, vilket leder till dålig resoloving och suddiga dåligt bildade band)

[ Top ] [Top]

Tranfer of Proteins to Membrane for Western Blotting Överföring av protein Membrane för Western blotting

Select Membrane Type: Välj Membrane Type:

Can use either: Kan använda antingen:

- PVDF membrane for western blots -- PVDF membran för Western blotting

- Nitrocellulose membrane for western blots -- Nitrocellulosa membran för Western blotting

- Nylon membrane (rarely used now - can tear) -- Nylon membrane (sällan används nu - kan riva)

Tips for Transfering to Western Membrane: Tips för överföring till Västra Membrane:

-Wear Gloves at all times! - Använd handskar vid alla tillfällen! Use forceps Använd Forceps

- Minimize touching/forceps to the membrane -- Minimera vidröra / Forceps att membranet

Bio-RAD transfer order: Bio-Rad överföring ordning:

(-)
sponge on black svampen på svart
filter paper filtrerpapper
gel nitrocellulose gel nitrocellulosa
filter paper filtrerpapper
sponge svamp
(+)

Transfer : Transfer:

- Keep cool in 4C -- Förvara svalna i 4C

- Transfer overnight at 35 V -- Överföring övernattning på 35 V

- Can transfer quickly in 1 hour at higher V -- Kan överföra snabbt i 1 timme vid högre V

[ Top ] [Top]

Western Blot Western Blot

Blocking of Membranes allows you to maximize signal:noise ratio Blockering av Membranes kan du maximera signal: noise ratio

- wear gloves -- Bära handskar

- Block with 5% Blotto (non-fat dry milk - powder) or 1 - 5% BSA (Bovine Serum Albumin) for phosphorylated proteins. -- Block med 5% Blotto (fettfri mjölktorrsubstans - pulver) eller 1 - 5% BSA (bovint serumalbumin) för phosphorylated proteiner.

- Buffer is TBST -- Buffert TBST

Washing After Blocking Tvätt Efter Blockering

- washing after blocking steps is not critical, as people often block during primary antibody incubations. -- Tvätt efter blockerar stegen inte är kritisk, eftersom människor ofta blockera under primär antikropp inkubation.

- washing is usually done with TBST buffer. -- Tvättning sker vanligen med TBST buffer. Can be done quickly with a large volume of TBST. Kan göras snabbt med stora TBST.

Incubation with Primary Antibody Inkubation med Primary Antibody

- mouse, rabbit or other species -- Mus, kanin eller andra arter

- usually 1 : 1000 dilution with TBST -- Vanligen 1: 1000 utspädning med TBST

- if high background/many non-specific bands is a problem, incubations can be done with 5% BSA or Milk. -- Om hög bakgrund / många icke-specifika band är ett problem, inkubation kan göras med 5% BSA eller mjölk.

Washing after Primary Antibody Tvätt efter Primary Antibody

- not so critical -- Inte så kritiskt

- can wash quickly with large volumes of TBST -- Kan tvätta snabbt med stora volymer av TBST

Incubation of Secondary Antibody Inkubation av sekundär antikropp

- usually diluted 1 : 10, 000 with TBST -- Vanligtvis spädas 1: 10, 000 med TBST

- anti-mouse, anti-rabbit, or other antibody conjugated with HRP enzyme for detection -- Anti-mus, anti-kanin, eller annan antikropp konjugerad med HRP enzym för detektion

Washing After Secondary Antibody Tvätt Efter Secondary Antibody

- CRITICAL -- KRITISKA

- Wash 5 X for 5 minutes with TBST. -- Tvätta 5 x 5 minuter med TBST.

- If you really must rush, wash at least 3 times with larger volumes of TBST. -- Om du verkligen måste rusa, tvätta minst 3 gånger med större volymer av TBST.

Assaying for Results Analysera för resultat

- usually ECL (Enhanced Chemiluminescence) is used -- Vanligtvis ECL (Enhanced chemiluminescence) används

- film is exposed and developed. -- Filmen är utsatta och utvecklas. Exposure for 10 seconds is usually enough for total protein. Exponering under 10 sekunder är vanligtvis tillräckligt för total protein. Phospho-proteins can require 2 - 20 minute exposures. Phospho-proteiner kan kräva 2 - 20 minuters exponeringar.

- film is usually XOMAT or similar 'fast' film -- Filmen är vanligtvis XOMAT eller liknande "snabb" film

[ Top ] [Top]

See Troubleshooting Western Blot Se Felsökning Western Blot

Terms used in western blotting: Termer som används i Western blotting:

WB - western blot WB - Western Blot

IB - immunoblot (another term for western blotting) IB - immunoblot (en annan term för western blotting)

SDS - Sodium Dodecyl Sulfate (a detergent used in many western blotting solutions) SDS - natriumdodecylsulfat (ett rengöringsmedel som används i många western blotting lösningar)

PAGE - Polyacrilamide Gel Electrophoresis SIDA - Polyacrilamide gelelektrofores

Ab - Antibody (antibodies are used to detect your protein of interest) Ab - Antibody (antikroppar används för att upptäcka ditt protein av intresse)

HRP - Horse Radish Peroxidase HRP - Horse Rädisa Peroxidase

Luminol - substrate that HRP cleaves to cause light formation Luminol - substrat att HRP cleaves att orsaka lätta formation

ECL - Enhanced Chemiluminescence ( western blot solution which enhances light formation from HRP + Luminol) ECL - Förstärkt chemiluminescence (Western Blot lösning som förbättrar ljuset bildandet av HRP + Luminol)

kD/kDa - kilodalton (most proteins average between 30 - 80 kDa) kD / kDa - kilodalton (mest proteiner genomsnitt mellan 30 - 80 kDa)

RAM - rabbit anti-mouse Ig RAM - kanin anti-mus Ig

Ig - Immunoglobulin(an antibody isotype) Ig - Immunoglobulin (en antikropp isotypspecifika)

NP-40 - Nonidet P-40 NP-40 - Nonidet P-40

PMSF - phenylmethylsulfonyl fluoride PMSF - phenylmethylsulfonyl fluor

BSA - Bovine Serum Albumin BSA - bovint serumalbumin

NFDM - Non-fat dry Milk NFDM - Fettfri mjölktorrsubstans

[ Top ] [Top]

[ Top ] [Top]